华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验12 叶绿体的分离

实验122叶绿体的分离一、目的了解叶绿体的分离方法二、材料用具及仪器药品离心机、研钵、量筒、移液管、容量瓶、0.35mo1/LNaCl、0.01mo1/L三羟基氨基甲烷缓冲溶液（Tris）、pH7.8、盐酸、沙布附Tris缓冲液的配制（见表）PHX7.244.27. 441.17.638.47.832.58.026.88.221.98.416.58.612.28.88.15.09.0贮备A：0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris-hydrorymethyiaminomethane）溶液（24.2gCHmNO配成1000ml）。贮备B：0.2mo1/LHC1取量：50mlA×XmlB稀释至200ml三、原理分离叶绿体应在等渗溶液（0.35mo1/LNaC1+0.01mo1/Ltris缓冲液）中制备，用等渗溶液将叶子研磨然后通过离心的方法将叶绿体分离出来（整个过程应在0一5℃下进行）四、方法步骤（1）最好在晴天上午10时左右选取生长正常的菠菜叶子（菜心、白菜、豌豆也可）洗干净，用吸水纸擦干，去柄及粗脉，称5克叶子。（2）将叶子剪碎放在研钵中，加10ml0.35mol/LNaCl、1ml0.01mol/LtrisHC1缓冲液及少量的石英砂，研磨成匀浆。（3）把匀浆倒在二层沙布中过滤。（4）取滤液在约1000rpm（每分钟的转速）的速度离心2分钟，弃沉淀，要上清液。（5）上清液在3000rpm离心5分钟，弃上清液，沉淀即是叶绿体。（6）将沉淀（叶绿体）加入0.35mo1/NaCl溶液5ml，即为叶绿体悬液。四、实验报告叶绿体的分离应该注意哪些问题？五、思考题

实验 12 叶绿体的分离 一、目的 了解叶绿体的分离方法 二、材料用具及仪器药品 离心机、研钵、量筒、移液管、容量瓶、0.35mol/LNaCl、0.01mol/L 三羟基氨基甲烷 缓冲溶液（Tris）、pH7.8、盐酸、沙布 附 Tris 缓冲液的配制（见表） PH X 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 44.2 41.1 38.4 32.5 26.8 21.9 16.5 12.2 8.1 5.0 贮备 A： 0.2mol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris-hydrorymethyiamino methane）溶液 （24.2gC4H11NO3 配成 1000ml）。 贮备 B：0.2mol/L HCl 取量：50mlA×XmlB,稀释至 200ml 三、原理 分离叶绿体应在等渗溶液（0.35mol/L NaCl+0.01mol/L tris 缓冲液）中制备，用等渗 溶液将叶子研磨然后通过离心的方法将叶绿体分离出来（整个过程应在 0—5 o C 下进行）。 四、方法步骤 （1）最好在晴天上午 10 时左右选取生长正常的菠菜叶子（菜心、白菜、豌豆也可）洗 干净，用吸水纸擦干，去柄及粗脉，称 5 克叶子。 （2）将叶子剪碎放在研钵中，加 10m1 0.35mol/L NaCl、1ml 0.01mol/Ltris HCl 缓冲 液及少量的石英砂，研磨成匀浆。 （3）把匀浆倒在二层沙布中过滤。 （4）取滤液在约 1000rpm（每分钟的转速）的速度离心 2 分钟，弃沉淀，要上清液。 （5）上清液在 3000rpm 离心 5 分钟，弃上清液，沉淀即是叶绿体。 （6）将沉淀（叶绿体）加入 0.35mol/L NaCl 溶液 5ml，即为叶绿体悬液。 四、实验报告 叶绿体的分离应该注意哪些问题？ 五、思考题

1、分离叶绿体为什么要用等渗浓度的溶液？2、分离叶绿体的过程为什么要在0-5℃下进行？

1、分离叶绿体为什么要用等渗浓度的溶液？ 2、分离叶绿体的过程为什么要在 0-5℃下进行？