华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验29 考玛斯蓝染料结合法

考玛斯蓝染料结合法（一）目的学生用考玛斯蓝方法测定蛋白质含量。（二）材料用具及仪器药品白菜梗、水果汁、721型分光光度计、电子天平、容量瓶、移液管标准牛血清蛋白溶液：称取牛血清蛋白10mg，溶于100ml蒸馏水中，浓度为100ug/ml。染料试剂：称取考玛斯蓝G—250（CoomassidbrilliantblueG—250）60mg，溶于100ml13%过氯酸溶液中，滤去未溶解的染料，贮于棕色瓶中。（三）原理考玛斯蓝溶液为棕褐色，若与蛋白质结合则为蓝色，溶液蓝色的深浅代表蛋白质含量的高低，蓝色越深，表明蛋白质含量越高。（四）方法步骤1.以第列不同浓度（1一50ug）的标准牛血清蛋白溶液2ml，分别加入染料试剂2ml，立即混匀，于分光光度计波长620nm测定光密度，以蒸馏水2ml加染料试剂2ml，作为比色空白对照，2.称1g白菜梗（或豆芽水果），放在研钵中研磨成匀浆，用水定量至25ml，过滤。取2ml滤液，用上述同样的方法，测定样品溶液的光密度。然后从标准曲线上查得蛋白质浓度。3.计算所测样品中蛋白质含量。（五）实验报告计算所测材料的蛋白质含量。（六）思考题用考玛斯蓝染料结合法测定蛋白质含量有什么优缺点？

考玛斯蓝染料结合法 （一）目的 学生用考玛斯蓝方法测定蛋白质含量。 （二）材料用具及仪器药品 白菜梗、水果汁、721 型分光光度计、电子天平、容量瓶、移液管 标准牛血清蛋白溶液：称取牛血清蛋白 10mg，溶于 100ml 蒸馏水中，浓度为 100ug/ml。 染料试剂：称取考玛斯蓝 G—250（Coomassid brilliant blue G—250）60mg，溶于 100ml 13%过氯酸溶液中，滤去未溶解的染料，贮于棕色瓶中。 （三）原理 考玛斯蓝溶液为棕褐色，若与蛋白质结合则为蓝色，溶液蓝色的深浅代表蛋白质含量的 高低，蓝色越深，表明蛋白质含量越高。 （四）方法步骤 1．以第列不同浓度（1—50ug）的标准牛血清蛋白溶液 2ml，分别加入染料试剂 2ml， 立即混匀，于分光光度计波长 620nm 测定光密度，以蒸馏水 2ml 加染料试剂 2ml，作为比色 空白对照， 2．称 1g 白菜梗（或豆芽水果），放在研钵中研磨成匀浆，用水定量至 25ml，过滤。取 2ml 滤液，用上述同样的方法，测定样品溶液的光密度。然后从标准曲线上查得蛋白质浓度。 3．计算所测样品中蛋白质含量。 （五）实验报告 计算所测材料的蛋白质含量。 （六）思考题 用考玛斯蓝染料结合法测定蛋白质含量有什么优缺点？