华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验15 植物组织中可溶性糖含量的测定

实验15植物组织中可溶性糖含量的测定一、目的学会植物组织中可溶性糖含量的测定方法，了解不同的植物组织可溶性糖含量的高低。二、材料用具及仪器药品1.材料：水果或蔬菜2.仪器用具：分光光度计、天平、恒温水浴锅、研钵、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、试管、移液管、漏斗3.药品：乙醚、草酸钠、饱和醋酸铅标准葡萄糖母液：在电子天平上称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容至500ml，则得每ml含糖量为200ug的标准溶液。葱酮试剂：称取1g葱酮结晶粉末，溶解于1000ml稀硫酸溶液中即得。【稀硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84）稀释成1000m1而成三、原理植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蕙酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和葱酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。H,SO4糖+糖醛脱水糠醛+葱酮蓝绿色的缩合物四、方法步骤1.标准曲线的制作。取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液各10毫升，浓度分别为每毫升含糖0、25、50、75、100、120、150、200微克。将试管编号，依次将每管中加入1毫升上述葡萄糖标准溶液及5毫升的蕙酮试剂，震荡使之完全混合，在沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后在分光光度计波长620纳米下比色，测定各溶液的光密度，以光密度为纵坐标，糖溶液浓度为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。2.测定样品的可溶性糖含量称取重量5g的新鲜植物叶子，于研钵中仔细研磨，研磨时加乙醚少许，直至为止，倒入烧杯中，用热水（70℃）洗涤研钵，洗涤液并入烧杯中，再加入蒸馏水约30～40ml。将烧杯放在水浴锅上加热，保持温度70～80℃半小时，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止，然后将此混合物连同残渣一并洗水100ml容量瓶中，加水至刻度，充分摇荡，用漏斗过滤到三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2一一0.4g）的草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液

实验 15 植物组织中可溶性糖含量的测定 一、目的 学会植物组织中可溶性糖含量的测定方法，了解不同的植物组织可溶性糖含量的高低。 二、材料用具及仪器药品 1.材料：水果或蔬菜 2.仪器用具：分光光度计、天平、恒温水浴锅、研钵、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、试管、 移液管、漏斗 3.药品： 乙醚、草酸钠、饱和醋酸铅 标准葡萄糖母液： 在电子天平上称取 100mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容至 500ml，则得每 ml 含糖量为 200ug 的标准溶液。 蒽酮试剂： 称取 1g 蒽酮结晶粉末，溶解于 1000ml 稀硫酸溶液中即得。[稀硫酸溶液由 760ml 浓硫 酸（比重 1.84）稀释成 1000ml 而成] 三、原理 植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外， 其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和 蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。 H2SO4 糖 糠醛 脱水 糠醛+蒽酮 蓝绿色的缩合物 四、方法步骤 1.标准曲线的制作。 取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液各 10 毫升，浓度分别为每毫升含糖 0、 25、50、75、100、120、150、200 微克。将试管编号，依次将每管中加入 1 毫升上述葡萄 糖标准溶液及 5 毫升的蒽酮试剂，震荡使之完全混合，在沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却， 然后在分光光度计波长 620 纳米下比色，测定各溶液的光密度，以光密度为纵坐标，糖溶液 浓度为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 2.测定样品的可溶性糖含量 称取重量 5g 的新鲜植物叶子，于研钵中仔细研磨，研磨时加乙醚少许，直至为止，倒 入烧杯中，用热水（70o C）洗涤研钵，洗涤液并入烧杯中，再加入蒸馏水约 30～40ml。将烧 杯放在水浴锅上加热，保持温度 70～80o C 半小时，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅 以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止，然后将此混合物连同残渣一并洗水 100ml 容量瓶中，加水至刻度，充分摇荡，用漏斗过滤到三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约 0.2——0.4g）的草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤， 所得透明滤液即为可溶性糖提取液

取1ml这种糖提取液，加入5ml葱酮试剂，混匀后立即置于沸水中，煮沸10分钟，取出冷却后比色。计算根据光密度值从标准曲线上查出相应的糖含量，按下列公式计算出样品的含糖量：CxV可溶性糖含量%=X100%W×106A为植物样品稀释后的体积（ml)C为提取液的含糖量（μg/ml）w为植物组织鲜重量（g）五、实验报告计算所测植物组织中的可溶性糖的含量

取 1ml 这种糖提取液，加入 5ml 蒽酮试剂，混匀后立即置于沸水中，煮沸 10 分钟，取 出冷却后比色。 计算 根据光密度值从标准曲线上查出相应的糖含量，按下列公式计算出样品的含糖量： 可溶性糖含量% = 6 10  W C V ×100% A 为植物样品稀释后的体积（ml） C 为提取液的含糖量（μg/ml） W 为植物组织鲜重量（g） 五、实验报告 计算所测植物组织中的可溶性糖的含量