华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验21 植物缺水程度的鉴定

实验21植物缺水程度的鉴定（脯氨酸法）一、目的学会植物缺水程度的鉴定方法二、材料用具及仪器药品721分光光度计、烧杯、水浴锅、离心机、移液管研钵、容量瓶、具塞试管、冰醋酸、80%乙醇、脯氨酸、节三酮试剂：250g三酮于60ml冰醋酸和40ml16mo1/L磷酸中，加热（70℃）溶解，使用前再配。三、原理当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参数指标。用人造沸石（Permutit）在pH1一7范围内振荡溶液可除去干扰的氨基酸或使不与节三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等）。脯氨酸与三酮试剂呈显色反应，其含量与色度呈正相关，可用分光光度计测定，该方法有专一性。四、方法步骤绘制标准曲线取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀释成下列浓度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30ug/ml。冰醋酸2ml，三酮试剂2ml加入试管中，用橡皮塞塞紧，于沸水浴中加热15分钟，在分光光度计（波长515nm下进行比色测定，以浓度0为空白对照，将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以光密度为纵坐标作标准曲线。植株样品液的提取选取植株功能叶片2g，用3m180%乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状，用80%乙醇洗研钵，将提取物和洗液置于试管中。80%乙醇总量为10ml，加盖置于黑暗中室温下提取24小时。将提取液放在有活性碳的滤纸上过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣，将提取液置于试管中，加其重量1/5的人造沸石强烈振荡5分钟，将上层液用离心机离心10分钟，取上清液备用。样品液的测定将离心后所得到的上清液，取2ml置于试管中，再加入2ml冰醋酸和2ml节三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热15分钟，用3ml80%乙醇代替样品液作为对照，在分光光度计515nm波长下进行比色测定，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。五、实验报告计算所测材料脯氨酸含量六、思考题为什么植物在干旱条件下脯氨酸含量会增高？

实验 21 植物缺水程度的鉴定（脯氨酸法） 一、目的 学会植物缺水程度的鉴定方法 二、材料用具及仪器药品 721 分光光度计、烧杯、水浴锅、离心机、移液管 研钵、容量瓶、 具塞试管、冰醋酸、８０％乙醇、脯氨酸、 茚三酮试剂：２５０g 茚三酮于６０ml 冰醋酸和４０ml１６mol/L 磷酸中，加热（７０℃） 溶解，使用前再配。 三、原理 当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株 体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参数指标。 用人造沸石（Permutit）在 pH1—7 范围内振荡溶液可除去干扰的氨基酸或使不与茚三 酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等）。 脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与色度呈正相关，可用分光光度计测定，该方法有 专一性。 四、方法步骤 绘制标准曲线 取脯氨酸溶于 80%乙醇中，然后稀释成下列浓度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、 20、25、30ug/ml。冰醋酸 2ml，茚三酮试剂 2ml 加入试管中，用橡皮塞塞紧，于沸水浴中 加热 15 分钟，在分光光度计（波长 515nm 下进行比色测定，以浓度 0 为空白对照，将测定 结果以脯氨酸浓度为横坐标，以光密度为纵坐标作标准曲线。 植株样品液的提取 选取植株功能叶片 2g，用 3m180%乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状，用 80%乙醇洗研 钵，将提取物和洗液置于试管中。80%乙醇总量为 10ml，加盖置于黑暗中室温下提取 24 小 时。 将提取液放在有活性碳的滤纸上过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣，将提取液置 于试管中，加其重量 1/5 的人造沸石强烈振荡 5 分钟，将上层液用离心机离心 10 分钟，取 上清液备用。 样品液的测定 将离心后所得到的上清液，取 2ml 置于试管中，再加入 2ml 冰醋酸和 2ml 茚三酮试剂， 加盖密封，在沸水浴上加热 15 分钟，用 3ml 80%乙醇代替样品液作为对照，在分光光度计 515nm 波长下进行比色测定，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。 五、实验报告 计算所测材料脯氨酸含量 六、思考题 为什么植物在干旱条件下脯氨酸含量会增高？