华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验30 紫外吸收法测定蛋白质含量

紫外吸收法测定蛋白质含量（一）目的学会用紫外吸收法测定蛋白质含量的方法。（二）仪器751型分光光度计（三）原理大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，warburg一一等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。该方法是以酵母烯酶蛋白和酵母核酸为标准建立计算公式，而不同蛋白质的氨基酸组成也不同，因而光吸收也不尽相同，这就会带来误差。（四）方法步骤1.取待测样品溶液置于光径1cm的石英比色杯中，于751型分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A和A26，用蒸留水（缓冲溶液或盐溶液，视样品溶液而定）为比色空白对照。2.根据下列公式计算样品中的蛋白质含量。蛋白质含量（mg/m1）=1.55Az80—0.76A260（五）实验报告计算所测材料蛋白质的含量。（六）思考题1、这里介绍了几种测定蛋白质含量的方法，它们所根据的原理是什么？2、试比较测定蛋白质含量的几种方法的优缺点

紫外吸收法测定蛋白质含量 （一）目的 学会用紫外吸收法测定蛋白质含量的方法。 （二）仪器 751 型分光光度计 （三）原理 大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光 280nm 有吸收高峰，可以进行蛋 白质含量的测定。但是核酸在 280nm 也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在 260nm， warburg——等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在 280nm 和 260nm 时 A 的比值，然后通过计算 消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 该方法是以酵母烯酶蛋白和酵母核酸为标准建立计算公式，而不同蛋白质的氨基酸组成 也不同，因而光吸收也不尽相同，这就会带来误差。 （四）方法步骤 1．取待测样品溶液置于光径 1cm 的石英比色杯中，于 751 型分光光度计波长 280nm 和 260nm，分别读取 A280和 A260，用蒸馏水（缓冲溶液或盐溶液，视样品溶液而定）为比色空白 对照。 2．根据下列公式计算样品中的蛋白质含量。 蛋白质含量（mg/ml）=1.55A280—0.76A260 （五）实验报告 计算所测材料蛋白质的含量。 （六）思考题 1、这里介绍了几种测定蛋白质含量的方法，它们所根据的原理是什么？ 2、试比较测定蛋白质含量的几种方法的优缺点