华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验13 离体叶绿体对染料的还原作用

实验13离体叶绿体对染料的还原作用一、目的了解希尔反应。二、仪器及药品分光光度计、烧杯、试管、移液管、容量瓶0.1mo1/L磷酸缓冲液、pH7.30.3mmo1/L2.6一二氯酚吲哚酚钠：称取0.0087g二氯酚吲哚酚钠定容至100ml。三、原理分离的叶绿体能使染料2.6一二氯酚吲哚酚进行需光还原作用，使染料从蓝色变为无色，这些变化在2一3分钟内呈线性关系。2H（H0光解过程）氧化型2.6一二氯酚吲味酚还原型2.6一二氯酚吲哚酚(蓝色)（无色）四、方法步骤(1)加样，取干净试管3支，按下表加入样品及其它试剂。叶绿体悬液煮沸0.3mo1/L二氯酚吲管号0.1mo1/L磷酸缓冲液(ml)（分钟）哚酚19. 4ml0. 1ml一0. 5ml25'9. 4ml0. 1ml0. 5ml39. 4ml0. 1ml-注意：（A）叶绿体悬液为前一实验所制备（B）2号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮5分钟。（C）3号管内调零点作对照（D）各试管都在最后加入二氯酚吲哚酚，且加入后立即摇匀此色。（2）比色。将上面的各试管液分别倒入比色杯中，立即在721分光光度计（波长620nm下）进行测定，读出光密度，然后将比色杯取出放在光下照光，约30秒钟，再测定光密度（以上设定步骤可进行3一4次）。五、实验报告作出叶绿体对染料的还原作用的曲线图。六、思考题分离的叶绿体在无光的条件下能还原2.6一二氯酚吲哚酚吗？

实验 13 离体叶绿体对染料的还原作用 一、目的 了解希尔反应。 二、仪器及药品 分光光度计、烧杯、试管、移液管、容量瓶 0.1mol/L 磷酸缓冲液、pH7.3 0.3mmol/L 2.6 一二氯酚吲哚酚钠：称取 0.0087g 二氯酚吲哚酚钠定容至 100ml。 三、原理 分离的叶绿体能使染料 2.6 一二氯酚吲哚酚进行需光还原作用，使染料从蓝色变为无 色，这些变化在 2—3 分钟内呈线性关系。 2H+（H2O 光解过程) 氧化型 2.6 一二氯酚吲哚酚 还原型 2.6 一二氯酚吲哚酚 (蓝色) (无色) 四、方法步骤 （1） 加样，取干净试管 3 支，按下表加入样品及其它试剂。 管号 0.1mol/L 磷酸缓冲液 叶绿体悬液 （ml） 煮沸 （分钟） 0.3mol/L 二氯酚吲 哚酚 1 9.4ml 0.1ml — 0.5ml 2 9.4ml 0.1ml 5′ 0.5ml 3 9.4ml 0.1ml — — 注意：（A）叶绿体悬液为前一实验所制备 （B）2 号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮 5 分钟。 （C）3 号管内调零点作对照 （D）各试管都在最后加入二氯酚吲哚酚，且加入后立即摇匀此色。 （2）比色。将上面的各试管液分别倒入比色杯中，立即在 721 分光光度计（波长 620nm 下）进行测定，读出光密度，然后将比色杯取出放在光下照光，约 30 秒钟，再测定光密度 （以上设定步骤可进行 3—4 次）。 五、实验报告 作出叶绿体对染料的还原作用的曲线图。 六、思考题 分离的叶绿体在无光的条件下能还原 2.6 一二氯酚吲哚酚吗？