华南师范大学：《植物生理学》课程教学资源（实验指导）实验14 叶绿素a和b含量的测定

实验14叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25m1）、漏斗、滤纸、乙醇(95%)三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据LambertBeer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：Des=83.31Ca+18.60C,:. (1). (2)De49=24.54Ca+44.24C..(1）（2)式中的Ds65、De4g为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。解方程式（1）（2)，则得：. (3)C=13.7De6s—5.76De4g*…Cr=25.8 D649—7.6 Da65*..(4)G=C,+C.-6. 10D6+20. 04 De.....(5)此时，G为总叶绿素浓度，Ca、C为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。四、方法步骤1.称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml。2.取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。计算结果：25×1叶绿素a含量（mg/g.FW）=Cx×10000.225×1叶绿素b含量（mg/g.FW）=Cg×10000.2251叶绿素总量（mg/g.FW）=G×10000.2五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量

实验 14 叶绿素 a 和 b 含量的测定（分光光度法） 一、目的 学会 Chla、b 含量的测定方法，了解叶片中 Chla、b 的含量。 二、材料用具及仪器药品 菠菜叶片、721 分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇 （95%） 三、原理 叶绿素 a、b 在波长方面的最大吸收峰位于 665nm 和 649nm，同时在该波长时叶绿素 a、 b 的比吸收系数 K 为已知，我们即可以根据 Lambert Beer 定律，列出浓度 C 与光密度 D 之 间的关系式： D665=83.31Ca+18.60Cb.(1) D649=24.54Ca+44.24 Cb.(2) (1)(2)式中的 D665、D649 为叶绿素溶液在波长 665nm 和 649nm 时的光密度。 为叶绿素 a、b 的浓度、单位为每升克数。 82.04、9.27 为叶绿素 a、b 在、在波长 665nm 时的比吸收系数。 16.75、45.6 为叶绿素 a、b 在、在波长 649nm 时的比吸收系数。 解方程式(1)(2)，则得 ： CA=13.7 D665—5.76 D649.(3) CB=25.8 D649—7.6 D665. (4) G=CA+CB=6.10 D665+20.04 D649.(5) 此时，G 为总叶绿素浓度，CA、CB 为叶绿素 a、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3） （4）（5）式，即可以计算叶绿素 a、b 及总叶绿素的总含量。 四、方法步骤 1．称取 0.1 克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇 10ml 共研磨成匀浆，再加 5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到 25ml。 2．取一光径为 1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规 格的比色杯中，作为对照，在 721 分光光度计下分别以 665nm 和 649nm 波长测出该色素液的 光密度。 计算结果： 叶绿素 a 含量（mg/g. FW）= 0.2 1 1000 25 CA   叶绿素 b 含量（mg/g.FW）= 0.2 1 1000 25 CB   叶绿素总量（mg/g.FW）= 0.2 1 1000 25 G   五、实验报告 计算所测植物材料的叶绿素含量

六、思考题测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长？

六、思考题 测定叶绿素 a、b 含量为什么要选用红光的波长？