烟台南山学院：《食品检验技术》课程教学课件（PPT讲稿）模块四 紫外-可见吸收光谱法1/2

模块四紫外一可见吸收光谱法分析 任务一分析操作与仪器维护 一、原理 二、仪器操作 三、实验条件的选择 四、光谱分析

模块四 紫外－可见吸收光谱法分析 任务一 分析操作与仪器维护 一、原理 二、仪器操作 三、实验条件的选择 四、光谱分析

定义 光谱分析法是指在光的作用下，通过测量物质产生的发射 光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的 分析方法称为吸光光度法

在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的 分析方法称为吸光光度法。 定义 光谱分析法是指在光的作用下，通过测量物质产生的发射 光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法

一、原理 光的基本性质 ⅴ光是一种电磁波，具有波粒二象性。 单色光：单一波长的光（由具有相同能量的光子组成） v白光：由各种单色光组成的复合光

光的基本性质  光是一种电磁波，具有波粒二象性。  单色光：单一波长的光(由具有相同能量的光子组成)  白光：由各种单色光组成的复合光 一、原理

绿 黄 青 橙 白光 青蓝 红 蓝 紫 光的互补示意图

白光 紫 绿 红 橙 蓝 青蓝 黄 青 光的互补示意图 白光

物质颜色和吸收光颜色之间的关系 吸收光 物质颜色 颜色 波长范围/mm 黄绿 紫 400-450 黄 蓝 450-480 橙 绿蓝 480-490 红 蓝绿 490-500 紫红 绿 500-560 紫 黄绿 560-580 蓝 黄 580-600 绿蓝 橙 600-650 蓝绿 红 650-700

物质颜色和吸收光颜色之间的关系 物质颜色 吸 收 光 颜色 波长范围/nm 黄绿 紫 400-450 黄 蓝 450-480 橙 绿蓝 480-490 红 蓝绿 490-500 紫红 绿 500-560 紫 黄绿 560-580 蓝 黄 580-600 绿蓝 橙 600-650 蓝绿 红 650-700

1.吸光度与透光度 透过度不：描述入射光透过 A T% 溶液的程度： 1.0 100 0.8 80 60 T=l/小o 0.6 0.4 40 吸光度A与透光度T的关系： 0.2 20 A =-IgT A、T、C三者的关系 朗伯-比尔定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应 用于各种光度法的吸收测量

透过度T: 描述入射光透过 溶液的程度: T = It /I0 吸光度A与透光度T的关系: A = -lgT 朗伯-比尔定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应 用于各种光度法的吸收测量。 1.吸光度与透光度

2、光的吸收定律 1.朗白-比尔定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐 明了光的吸收程度与吸收层厚度的关系。 A∝b 1852年比尔(Beer)又提出了光的吸收程度与吸收物浓度之 间的关系。 A∝C ·二者的结合称为朗伯-比尔定律A=εbc

2、光的吸收定律 1.朗白-比尔定律 • 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐 明了光的吸收程度与吸收层厚度的关系。 A ∝b • 1852年比尔(Beer)又提出了光的吸收程度与吸收物浓度之 间的关系。 A ∝c • 二者的结合称为朗伯-比尔定律 A =εb c

朗伯-比尔定律数学表达式 A=lg(I)=εbc 式中A:吸光度；描述溶液对光的吸收程度；(A无单位) b:液层厚度（光程长度），通常以cm为单位； c:溶液的摩尔浓度，单位molL; :摩尔吸光系数，单位L.mol-1.cm-1;在数值上等于浓度为 1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度； 或 A=Ig(Io/I)=a b c (A无单位) c: 溶液的浓度，单位gL1 : 吸光系数，单位Lg1cml,相当于浓度为1gL、液层厚 度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度

A＝lg(I0 /It ) ＝ εb c 式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；（A无单位） b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L-1； ε：摩尔吸光系数，单位L·mol-1·cm-1；在数值上等于浓度为 1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度； 或: A＝lg(I0 /It ) ＝ a b c （A无单位） c：溶液的浓度，单位 g·L-1 a：吸光系数，单位 L·g-1·cm-1 ，相当于浓度为1g/L、液层厚 度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。 朗伯–比尔定律数学表达式

摩尔吸收系数￡的讨论 (1)ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在 某一波长下的吸光度。 (2)吸收物质是在一定温度、波长和溶剂条件下的特征常数。 (3)不随浓度c和光程长度b的改变而改变。ε仅与吸收物质本 身的性质有关，与待测物浓度无关； (4)同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波 长，mar处的摩尔吸光系数，常以8ma表示。ma表明了该吸收物质 最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最 大灵敏度

摩尔吸收系数ε的讨论 （1） ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在 某一波长下的吸光度。 （2）吸收物质是在一定温度、波长和溶剂条件下的特征常数。 （3）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。ε仅与吸收物质本 身的性质有关，与待测物浓度无关； （4）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波 长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质 最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最 大灵敏度

(5)ema越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物 质的灵敏度越高。 通常，在max处： ε>105 超高灵敏的方法 e=(6~10)×104 高灵敏的方法 8=（2~6)×104 中灵敏的方法 e<2X104 不灵敏的方法 (6)可作为定性鉴定的参数； 个

（5）εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物 质的灵敏度越高。 通常，在λmax处： ε﹥ 105 超高灵敏的方法 ε＝（6～10）×104 高灵敏的方法 ε＝（2～6）×104 中灵敏的方法 ε﹤ 2 × 104 不灵敏的方法 （6）可作为定性鉴定的参数；