烟台南山学院：《食品检验技术》课程教学课件（PPT讲稿）模块四 紫外-可见分光光度法2/2

项目三分析实验条件的选择 1、 吸光度范围的选择 2、测定波长的选择 3、显色反应及其条件 、参比溶液的选择

项目三 分析实验条件的选择 1、吸光度范围的选择 2、测定波长的选择 3、显色反应及其条件 4、参比溶液的选择

1、吸光度范围的选择 控制浓度二→吸光度A:0.20.8

1、吸光度范围的选择 控制浓度 吸光度A：0.2～0.8

2、 测定波长的选择 选择原则：“吸收最大，干扰最小” 灵敏度 选择性 0.10 0.18 max wave=320nm 04 016 012 01 009 002 310 320 300 length(nm) 选择最大吸收波长(max)作为入射波长。 若干扰物质在人max处也有强烈吸收时，可选用 非最大吸收处的波长，但应尽可能选择A随波长改 变而变化不大的区域内的波长

2、测定波长的选择 选择原则：“吸收最大，干扰最小” 灵敏度 选择最大吸收波长（λmax ）作为入射波长。 若干扰物质在λmax处也有强烈吸收时，可选用 非最大吸收处的波长，但应尽可能选择A 随波长改 变而变化不大的区域内的波长。 选择性

3、显色反应及其条件 可见光区的吸光光度法只能用于测定有色溶液。 对无色溶液和颜色较浅的溶液进行测定时，必须将 被测组分转变成有色化合物（显色反应）。 能与被测组分反应使之生成有色化合物的试剂称为 显色剂

3、显色反应及其条件  可见光区的吸光光度法只能用于测定有色 溶液。  对无色溶液和颜色较浅的溶液进行测定时，必须将 被测组分转变成有色化合物(显色反应)。  能与被测组分反应使之生成有色化合物的试剂称为 显色剂

显色剂必须满足下述条件： (I)灵敏度要高：要求选择的显色剂能与待测组分生 成摩尔吸收系数较大的有色化合物。 (2)选择性要好。 (3)有色化合物稳定性好 0 (4)反应定量完成，否则再现性就较差。 (5)有色化合物与显色剂的最大吸收波长的差别要足 够大，一般要求相差60nm以上

显色剂必须满足下述条件： （1）灵敏度要高：要求选择的显色剂能与待测组分生 成摩尔吸收系数较大的有色化合物。 （2）选择性要好。 （3）有色化合物稳定性好 。 （4）反应定量完成，否则再现性就较差。 （5）有色化合物与显色剂的最大吸收波长的差别要足 够大，一般要求相差 60 nm 以上

显色条件的选择 1.显色剂的用量 2.溶液的酸度 3.显色温度 4.显色时间

显色条件的选择 1. 显色剂的用量 2. 溶液的酸度 3. 显色温度 4. 显色时间

1)显色剂的用量 吸光度A与显色剂用量c的关系会出现如 图所示的几种情况。选择曲线变化平坦处。 A 0 a'b' CR CR (a) (b) (c)

1）显色剂的用量 吸光度A与显色剂用量cR的关系会出现如 图所示的几种情况。选择曲线变化平坦处

2)溶液酸度 在相同实验条件下，分别测定不同H值条件 下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒 定的平坦区所对应的pH范围。 H

2）溶液酸度 在相同实验条件下，分别测定不同pH值条件 下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒 定的平坦区所对应的pH范围

3)显色温度及显色时间 (CMCR、pH一定)作A~T曲线，寻找适宜反应温度。 A 反应时间的选择：作A~t曲线，寻找适宜反应时间

3) 显色温度及显色时间 (CM、 CR 、 pH一定)作 A ~ T 曲线，寻找适宜反应温度。 A T A T A t A t 反应时间的选择:作A ~ t 曲线，寻找适宜反应时间

4.参比液的选择 原则：扣除比色皿、样品基体（非待测组分）和显色剂的吸收 A(样)=A(待测吸光物质)+A(干扰)+A(池) A（参比)=A(干扰)+A(池) 以显色反应为例进行讨论 M+R=M 若欲测MR的吸收 入max max 试样 显色剂 溶剂 吸光物质 参比液组成 无吸收 无吸收 光 吸收 溶剂 基体吸收 无吸收 学 吸收 不加显色剂的试液 无吸收 吸收 吸收 显色剂+溶剂 基体吸收 吸收 明 吸收 显色剂+试液+待测组分 掩蔽剂

4. 参比液的选择 原则：扣除比色皿、样品基体（非待测组分）和显色剂的吸收 以显色反应为例进行讨论 M + R = M-R max 试样 显色剂 溶剂 吸光物质 参比液组成 无吸收 无吸收 光 学 透 明 溶剂 基体吸收 无吸收 吸收 不加显色剂的试液 无吸收 吸收 吸收 显色剂+溶剂 基体吸收 吸收 吸收 吸收 显色剂+ 试液 + 待测组分的 掩蔽剂 若欲测 M-R 的吸收 max A （样） = A （待测吸光物质）+ A （干扰）+ A （池） A （参比） = A （干扰）+ A （池）