烟台南山学院：《食品检验技术》课程教学课件（PPT讲稿）模块七 高效液相色谱的课件

高效液相色谱分析

高效液相色谱分析

目录 高效液相色谱法的种类及测定原理 高效液相色谱仪仪器的操作 ● 三、 高效液相色谱分离操作条件的选择 高效液相色谱分析 高效液相色谱仪器的维护保养

目录 • 一、高效液相色谱法的种类及测定原理 • 二、高效液相色谱仪仪器的操作 • 三、高效液相色谱分离操作条件的选择 • 四、高效液相色谱分析 • 五、高效液相色谱仪器的维护保养

一、色谱技术 1.色谱起源： 石油醚 俄国植物学家茨维 色素 特于1906年分离叶绿 碳酸钙颗粒 素 玻璃柱

一、色谱技术 石油醚 碳酸钙颗粒 色素 玻璃柱 1.色谱起源： 俄国植物学家茨维 特于1906年分离叶绿 素

2色谱法原理： 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相 时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸 附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱 不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定 相中流出。又称为色层法、层析法

2.色谱法原理： 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相 时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸 附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱 不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定 相中流出。又称为色层法、层析法。 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 0 10 20 30 40 mV检测器 A:214nm

3.色谱技术的分类 按两相状态： 气相色谱法，气固色谱法， 气液色谱法，液 相色谱法，液固色谱法，液液色谱法。 按固定相的几何形式： 柱色谱法，纸色谱法，薄层色谱法。 按分离原理： 吸附色谱法，分配色谱法，离子交换色谱法， 尺寸排阻色谱法，亲和色谱法

按两相状态： 气相色谱法， 气固色谱法 ，气液色谱法 ，液 相色谱法 ，液固色谱法 ，液液色谱法。 按固定相的几何形式： 柱色谱法，纸色谱法，薄层色谱法。 按分离原理： 吸附色谱法，分配色谱法，离子交换色谱法， 尺寸排阻色谱法，亲和色谱法。 10 20 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 3.色谱技术的分类 30 40 mV检测器 A:214nm

二、液相色谱 1.液相色谱概论 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱 在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典 液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个 小时)。 高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLc)是在经典液相色谱法的 基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而 迅速发展起来的

二、液相色谱 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱 在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典 液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个 小时）。 高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的 基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而 迅速发展起来的。 10 20 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 1.液相色谱概论 30 40 mV检测器 A:214nm

2.区别 高效液相色谱法与经典液相色谱法的区别是 填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起 高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色 谱法，又因分析速度快而称为高速液相色谱法，也 称现代液相色谱。 (High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)

高效液相色谱法与经典液相色谱法的区别是 填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起 高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色 谱法，又因分析速度快而称为高速液相色谱法，也 称现代液相色谱。 (High Pressure Liquid Chromatography，HPLC) (High Speed Liquid Chromatography，HSLP) 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 0 10 20 30 40 mV检测器 A:214nm 2.区别

3.高效液相色谱法优点 ◆ 速度快-通常分析一个样品1530min,有些甚 至在5min内即可完成。 ◆ 分辦率高-可选择固定相和流动相以达到最佳 离效果。 ◆灵敏度高-紫外检测器达0.01ng,荧光和电化 学检测器达0.1pg ◆ 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的 化合物。 样品量少，容易回收样品经过色谱柱后不被 破坏，可以收集单一组分或做制备

◆ 速度快-通常分析一个样品 15~30 min，有些甚 至在 5 min 内即可完成。 ◆ 分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳 分离效果。 ◆ 灵敏度高-紫外检测器达 0.01ng，荧光和电化 学检测器达 0.1pg ◆ 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的 化合物。 ◆ 样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被 破坏，可以收集单一组分或做制备。 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 0 10 20 30 40 mV检测器 A:214nm 3.高效液相色谱法优点

4.高效液相色谱法的分类 按分离机制： 液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交 换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 其中，液液分配色谱法按固定相和流动相的 极性又分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法RPC)

按分离机制： 液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交 换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 其中，液液分配色谱法按固定相和流动相的 极性又分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。 10 20 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 4.高效液相色谱法的分类 30 40 mV检测器 A:214nm

4.高效液相色谱法的分类 1.液固吸附色谱法 固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝，粒度：5-10μm 原理：固定相对组分吸附力大小的不同。分离过程是一个吸 附-解吸的平衡过程。 应用：分子量200-1000的组分，大多数用于非离子型 化合物，因为离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异 构体

10 20 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 min 4.高效液相色谱法的分类 30 40 mV检测器 A:214nm 1. 液固吸附色谱法 固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝，粒度：5-10μm 原理：固定相对组分吸附力大小的不同。分离过程是一个吸 附-解吸的平衡过程。 应用：分子量200-1000的组分，大多数用于非离子型 化合物，因为离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异 构体