《食品微生物学》课程教学课件（PPT讲稿）实验九 大肠菌群的测定

实验八食品中大肠菌群的测定大肠菌群是指一群在37℃、24h能发酵乳糖产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品卫生质量，具有广泛的卫生学意义。食品中大肠菌群数是以每100g（ml检样中大肠菌群最可能数（MPN）表示

实验八 食品中大肠菌群的测定 大肠菌群是指一群在37℃、24h能发酵乳糖、 产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽 孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为 粪便污染指标来评价食品卫生质量，具有广泛的 卫生学意义。食品中大肠菌群数是以每100g（ml） 检样中大肠菌群最可能数（MPN）表示

检样稀释乳糖胆盐发酵管（36+1℃，24+2h）不产气产大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板(36±1℃,24±2h)1(24±2h,36±1℃)报告革兰氏染色乳糖发酵管（36+1℃,24±2h）革兰氏染色阳性革兰氏阴性无芽胞杆菌不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性大肠杆菌阳性+报告报告报告大肠菌群检验程序

检样 稀释 乳糖胆盐发酵管(36+1℃,24+2h ) 不产气 大肠菌群阴性 报 告 产 气 伊红美兰琼脂平板(36+1℃,24+2h) ↓ (24+2h,36+1℃) 革兰氏染色 乳糖发酵管(36+1℃,24+2h) 革兰氏染色阳性 革兰氏阴性无芽胞杆菌 产气 不产气 大肠菌群阴性 报 告 大肠杆菌阳性 报 告 大肠菌群阴性 报 告 大肠菌群检验程序

滤膜法测定总大肠菌群一、实验目的1.学习食品中大肠菌群的检测方法和程序2.掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式

一、实验目的 1.学习食品中大肠菌群的检测方法和程序。 2.掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。 滤膜法测定总大肠菌群

二、实验原理用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，选择具有典型特征的菌落进行革兰氏染色，将革兰氏阴性的无芽胞杆菌再接种乳糖蛋白陈培养基液，于37℃C培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性

二、实验原理 用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌 被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上， 经培养后，选择具有典型特征的菌落进行革兰氏 染色，将革兰氏阴性的无芽胞杆菌再接种乳糖蛋 白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者， 则判定为总大肠菌群阳性

三、培养基与试剂1.品红亚硫酸钠培养基2.乳糖蛋白陈培养基

三、 培养基与试剂 1. 品红亚硫酸钠培养基 2. 乳糖蛋白胨培养基

四、#操作步骤1.滤膜灭菌2.滤器灭菌3、过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样注入滤器中，打开滤器阀门，抽滤

四、操作步骤 1、滤膜灭菌 2、滤器灭菌 3、过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将 粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上，固 定好滤器，将100mL水样注入滤器中，打 开滤器阀门，抽滤

4、培养取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平血倒置，放入37℃恒温箱内培养22~24h

4、培养 取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移 放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向 上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有 气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养 22~24h

5、观察结果挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。紫红色，具有金属光泽的菌落深红色，不带或略带金属光泽的菌落淡红色，中心色较深的菌落

5、 观察结果 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 紫红色，具有金属光泽的菌落。 深红色，不带或略带金属光泽的菌落。 淡红色，中心色较深的菌落

6、验证实验凡革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，再接种乳糖蛋白陈培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性

6、验证实验 凡革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，再接种乳 糖蛋白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产 气者，则判定为总大肠菌群阳性

五、实验结果计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100mL水样中的总大肠菌群数报告（CFU/100mL

五、实验结果 计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100mL 水样中的总大肠菌群数报告 (CFU/100mL)