《微生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验三 酵母细胞显微计数和显微测量

山东辉工大雾实验三酵母细胞显微计数和显微测量山东理工大学生命科学学院微生物学教研组2019年3月

实验三 酵母细胞显微计数和显微测量 山东理工大学生命科学学院 微生物学教研组 2019年3月 1

山东理工大家提纲1 实验目的2实验原理3实验材料4实验步骤5注意事项

提纲 2 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验步骤 5 注意事项

山东理工大雾I酵母细胞显微计数1实验目的·学习血细胞计数板计数的原理·掌握酵母细胞显微计数的方法

I 酵母细胞显微计数 3 • 学习血细胞计数板计数的原理 • 掌握酵母细胞显微计数的方法 1 实验目的

山东理工大客2实验原理XB-K-250.10mmSMICNmm?MADEIN400CHINA0.1mmXB-K-25#Maie计数准支机支柱1#mm400

2 实验原理

山东理工大案计数室红框代表：个大方格维代表十中内格蓝电部分是白监代表：不小细电计数区域每个大格而积为1.0m，容积为0.1mm双线框租小格中格（观线边）16小格），坚1计数版合25中格细的

计数室 双 线 框

计数室山东理工大客&.25大格×16小格型计数板B.16大格×25小格型计数板两种规格计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，其计数室的容积为0.1mm3（10-4mL)

两种规格计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大 方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片 后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1 mm，其计数室的容积为0.1 mm3（10-4 mL）。 计数室

山东翟工大家3实验材料·菌株：酿酒酵母·溶液：生理盐水·仪器或器材：普通光学显微镜、血球计数板、血盖片、计数器、毛细滴管、擦镜纸等

3 实验材料 7 • 菌株：酿酒酵母 • 溶液：生理盐水 • 仪器或器材：普通光学显微镜、血球计数板、血盖片、 计数器、毛细滴管、擦镜纸等

山东翟工大家4实验步骤·1镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物则需清洗，吹于后才能进行计数：2·加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去3，计数。稍待片刻（约5min）待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录

4 实验步骤

山东理工大雾·4. 计算25x16型计数板：设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/5X25×10000×B=50000A·B（个）16x25型的计数板：设四个中方格中的总菌数为A，则1mL菌液中的总菌数=A/4X16×10X1000×B=40000AB（个）表3-1显微计数结果二室平菌数各中格菌数AB均值计数室/mL15234第一室第二室

9 • 4. 计算 25x16型计数板：设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25 个中方格的计数板，则 1 mL菌液中的总菌数=A/5×25×10000×B=50000A·B（个） 16x25型的计数板：设四个中方格中的总菌数为A，则 1 mL菌液中的总菌数=A /4×16×10×1000×B=40000A·B（个） 表3-1 显微计数结果 计数室 各中格菌数 A B 二室平 均值 菌数 /mL 1 2 3 4 5 第一室 第二室

5注意事项山东理工大从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀。如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4一5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。10

10 5 注意事项