复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_聚合酶链反应 Polymerase Chain Reaction（PCR）

聚合酶链反应 Polymerase chain Reaction (PCR) 医学实验教学中心 邵红霞 chaohx fudan. edu.cn

聚合酶链反应 Polymerase Chain Reaction （PCR） 医学实验教学中心 邵红霞 shaohx@fudan.edu.cn

DNA—分子生物学的基础 CEGI 匚 B. DNA (B conformation) DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础

DNA ——分子生物学的基础 DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础

DNA一令人赞叹的空间艺术

DNA ——令人赞叹的空间艺术

分子生物学的三大主流技术 分子克隆 Molecular cloning DNA序列测定 DNA Sequencing 聚合酶链反应 Polymerase Chain reaction, PCR

分子生物学的三大主流技术 分子克隆 Molecular cloning DNA序列测定 DNA sequencing 聚合酶链反应 Polymerase Chain Reaction， PCR

内容概要 一.PCR的概念和发展史 二.PCR技术的原理 三.PCR反应体系和反应条件 Real time qPcr 四.PCR技术的发展和应用 DigitalPcr

内容概要 一. PCR的概念和发展史 二. PCR技术的原理 三. PCR反应体系和反应条件 四. PCR技术的发展和应用 Real time qPCR Digital PCR

什么是PCR? PCR是在引物引导下由DNA聚合 酶催化的对特定DNA序列进行连 续多次的体外扩增反应。 Kary B. Mullis(1944 -) 1983年,美国 PE-Cetus'公司

什么是PCR？ Kary B. Mullis (1944 -) 1983年，美国PE-Cetus公司 PCR是在引物引导下由DNA聚合 酶催化的对特定DNA序列进行连 续多次的体外扩增反应

35 二二二 Separate strands 1983年4月的某个周五晚上,Muis的灵感乍现

1983年4月的某个周五晚上， Mullis的灵感乍现

PCR技术诞生的时代背景 H. Ghobind Khorana及其同事(1971) 经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复 该过程便可克隆RNA基因。 迅速被遗忘 Dr Khorana, then at the University of wisconsin, shared the 1968 Nobel in physiology or medicine with Robert w. Holley of Cornell University and Marshall w. Nirenberg of the National Institutes of Health They worked independently and won the award "for their interpretation of the genetic code and its function in protein synthesis, according to the Nobel citation

PCR技术诞生的时代背景 H. Ghobind Khorana及其同事（1971）： 经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复 该过程便可克隆tRNA基因。 迅速被遗忘…… Dr. Khorana, then at the University of Wisconsin, shared the 1968 Nobel in physiology or medicine with Robert W. Holley of Cornell University and Marshall W. Nirenberg of the National Institutes of Health. They worked independently and won the award “for their interpretation of the genetic code and its function in protein synthesis,” according to the Nobel citation

PCR技术诞生的时代背景 DNA限制性内切酶的发现( Smith,1970年) DNA测序技术: Sanger的双脱氧终止法(1977年) Maxam- Gilbert化学裂解法(1977年) 体外合成寡核苷酸(六七十年代,尚未实现全自动化合成) 耐热DNA聚合酶(1988年, saiki引入PCR中,第一台PCR 仪问世)

PCR技术诞生的时代背景 DNA限制性内切酶的发现（Smith，1970年） DNA测序技术 ：Sanger的双脱氧终止法（1977年） Maxam-Gilbert 化学裂解法（1977年） 体外合成寡核苷酸 （ 六七十年代，尚未实现全自动化合成） 耐热DNA聚合酶（1988年，Saiki引入PCR中，第一台PCR 仪问世）

1983年, Mullis I的工作进展 1983年9月中旬 Mui在反应体系中加入DNA聚合酶后在37C一直保温,结果第 二天在琼脂糖凝胶电泳上没有看到任何条带。于是他认识到有必 要用加热来解链,每次解链后再加入DNA聚合酶进行反应,依次 循环。 1983年12月,他终于看到了10个循环后的49bp长度的第一个被同位 素标记的PCR条带

1983年9月中旬 Mullis在反应体系中加入DNA聚合酶后在37℃一直保温，结果第 二天在琼脂糖凝胶电泳上没有看到任何条带。于是他认识到有必 要用加热来解链，每次解链后再加入DNA聚合酶进行反应，依次 循环。 1983年12月，他终于看到了10个循环后的49 bp长度的第一个被同位 素标记的PCR条带。 1983年，Mullis 的工作进展