复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_实验二 重组DNA的提取及酶切鉴定

实验二重组DNA的提取 及酶切鉴定

实验二 重组DNA的提取 及酶切鉴定

实验一的结果1 连接组 阳性对照组

实验一的结果1 连接组 阳性对照组

实验一的结果2 连接组 阳性对照组

实验一的结果2 连接组 阳性对照组

实验目的

实验目的 1

掌握以下方法和技术: 1.质粒DNA的小量快速制备 2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 3.DNA的琼脂糖凝胶电冰

掌握以下方法和技术： 1. 质粒DNA的小量快速制备 2. 质粒DNA的限制性内切酶酶切 3. DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验原理

实验原理 2

1.质粒DNA的小量快速制备 分离质粒DNA有三个步骤: 1.培养细菌使质粒扩增 2.收集和裂解细菌(本实验:SDS裂解) 3.分离和纯化质粒DNA(本实验:碱变性法)

分离质粒DNA有三个步骤： 1. 培养细菌使质粒扩增 2. 收集和裂解细菌（本实验：SDS裂解） 3. 分离和纯化质粒DNA（本实验：碱变性法） 1. 质粒DNA的小量快速制备

碱变性法抽提质粒DNA Solution II Solution II 离心后去向 pH12. 6 pH4.8 染色体「氢键断裂, DNA 双螺旋解开不能复性沉淀中 氢键部分断 质粒DN4/裂,cDNA复性 互补链不完 上清中 全分离

碱变性法抽提质粒DNA Solution II pH12.6 Solution III pH4.8 离心后去向 染色体 DNA 氢键断裂， 双螺旋解开 不能复性 沉淀中 质粒DNA 氢键部分断 裂，cccDNA 互补链不完 全分离 复性 上清中

硅基质材料树脂)与DNA双链相互作用的原理 DNA分子中的磷酸二酯键骨架在盐溶液 的作用下脱水,使得暴露的磷酸基团吸附硅 胶。双链DNA分子一旦被硅胶吸附,一般的 洗液不能将其洗脱下来,只有水溶性的缓冲 液,如TE或水重新水化后,DNA才能从层 析柱上定量回收

硅基质材料(树脂）与DNA双链相互作用的原理 DNA分子中的磷酸二酯键骨架在盐溶液 的作用下脱水，使得暴露的磷酸基团吸附硅 胶。双链DNA分子一旦被硅胶吸附，一般的 洗液不能将其洗脱下来，只有水溶性的缓冲 液，如TE或水重新水化后，DNA才能从层 析柱上定量回收

2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 C-myc基因片段4.8 kb BamH I+XbaI双酶切(酶切完 全时) pSV-c-myc 琼脂糖凝胶电泳凝胶中2条区带 BamH I 35 kb psV2載体片段 x8bc-myc目的基因片段 pSⅤ2载体片段3.5kb

2. 质粒DNA的限制性内切酶酶切 BamH I + Xba I双酶切（酶切完 全时） 琼脂糖凝胶电泳凝胶中2条区带 3.5kb pSV2载体片段 4.8kb c-myc 目的基因片段 pSV-c-myc BamH I Xba I c-myc基因片段4.8 kb pSV2载体片段3.5kb