复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学资源_实验一 DNA重组与细胞转化——实验准备

实验一载体与目的基因的连接与转化 3人/每组(共40组) 1.浇好的LB平板; 1.玻璃推棒;酒精棉球罐:;镊子;火柴; 2.接种环 酒精灯;记号笔:胶头;洗耳球 玻璃推棒 2.1.5 mL Epp试管架;15mL试管架 4.玻璃试管和试管盖 3.装冰的小盆;废液杯:废物桶 5.20μL加样枪及枪头; 4.加样枪(1m、100uL、20μL) 6.记号笔; 及枪头; 7.1.5、15 mL Eppendorf管及架 5.饭盒:内装15mL塑料离心管×2 8.酒精灯 1.5 mL Epp管×5 9.提前一天养好的HB101菌5m1×3管 滴管×2 (每个实验室 消毒纸巾×10 6.长玻璃试管,内装5m1LB培养液:四.仪器: 7. 0. 1 M CaCl2 1. 5ml 8.1.5 mI Epp管,无菌分装0.5mlLB 1.16℃水浴锅(内有1.5ml水漂,11 培养液 孔); 9.含100μg/mL氨苄青霉素的LB板 2.42℃水浴锅(内有1.5m1水漂,11 ×2(37℃预热;临用前发) 孔) 10.ddH200.5mL 管架×22孔(作为摇床 11.目的基因c-mye(20ng/μL)3uL 里的支架) 12.PBR322质粒载体(20ng/μL)3ul 4.旋涡振荡器 13.阳性对照(5ng/uL)1uL 5.低温15mL离心机 14.10×T4连接酶 Buffer1.5uL 6.低温1.5皿L离心机; 7.室温1.5皿L离心机 二.全班共用(讲台冰盒中): 8.制冰机 37℃孵箱 1.T4DMA连接酶(-20℃) 10.37℃空气浴摇床 11.4℃冰箱 讲台托盘中:

实验一 载体与目的基因的连接与转化 一．3 人/每组（共 40 组） 1．玻璃推棒；酒精棉球罐；镊子；火柴； 酒精灯；记号笔；胶头；洗耳球 2．1.5 mL Epp 试管架；15 mL 试管架； 3．装冰的小盆；废液杯；废物桶； 4．加样枪（1 ml、100 μL、20 μL） 及枪头； 5．饭盒：内装15 mL 塑料离心管×2 1.5 mL Epp 管×5 滴管×2 消毒纸巾×10 6．长玻璃试管，内装 5ml LB 培养液； 7．0.1 M CaCl2 1.5ml 8. 1.5ml Epp 管，无菌分装 0.5ml LB 培养液 9. 含 100μg/mL 氨苄青霉素的 LB 板 ×2（37℃预热；临用前发） 10. ddH2O 0.5 mL 11. 目的基因 c-myc（20 ng/μL）3 uL； 12. PBR322 质粒载体（20 ng/μL）3ul； 13. 阳性对照(5ng/uL) 1uL 14. 10×T4 连接酶 Buffer 1.5 uL 二．全班共用（讲台冰盒中）： 1. T4DNA 连接酶（-20℃）； 三．讲台托盘中： 1．浇好的 LB 平板； 2．接种环； 3．玻璃推棒； 4．玻璃试管和试管盖； 5．20 μL 加样枪及枪头； 6．记号笔； 7．1.5 、15 mL Eppendorf 管及架； 8．酒精灯； 9．提前一天养好的 HB101 菌 5ml×3 管 （每个实验室） 四．仪器： 1． 16℃水浴锅（内有 1.5ml 水漂，11 孔）； 2． 42℃水浴锅（内有 1.5ml 水漂，11 孔）； 3． 1.5 mL Epp 管架×22 孔（作为摇床 里的支架）； 4． 旋涡振荡器； 5． 低温 15 mL 离心机； 6． 低温 1.5 mL 离心机； 7． 室温 1.5 mL 离心机； 8． 制冰机； 9． 37℃孵箱； 10． 37℃空气浴摇床 11．4℃冰箱

实验一、二试剂配方 1. 5N NaoH 20g溶于H2O至终体积100ml,高压灭菌 2. 0.1 M Ca Clz 1.lg溶于HO至终体积100ml,高压灭菌或无菌抽滤 3. 60 mg/ml Amp 0.6g溶于ddH1O至终体积10ml,无菌抽滤 4.LB培养基 Bacto-tryptone10g)溶于950mHO,5 NNaoho约02ml) Bacto-yeast extract 5g或一小块固体NaOH调节调pH至7.0, Nacl 10g 加H2O至终体积1000ml,高压灭菌 5.含琼脂的LB培养基 15g加入LB中,高压灭菌,轻轻旋动使琼脂溶解,冷 至50度左右浇板或加入抗生素后浇板。 6.TE(pH8.0) I MTris(pH8.0) 10ml1溶于H2O至终体积1000ml 0.5 MEDTA(pH8.0)2mlJ高压灭菌 7. IM Tris(pH8.0) 121 Ig Tris溶于800mlH2O,浓盐酸42ml调pH8.0,加 入H2O至终体积1000ml,高压灭菌

实验一、二试剂配方 1. 5 N NaOH 20g 溶于 H2O 至终体积 100ml，高压灭菌 2. 0.1 M CaCl2 1.1g 溶于 H2O 至终体积 100ml，高压灭菌或无菌抽滤 3. 60 mg/ml Amp 0.6 g 溶于 ddH2O 至终体积 10ml，无菌抽滤 4. LB 培养基 Bacto-tryptone 10g 溶于 950ml H2O，5N NaOH(约 0.2ml） Bacto-yeast extract 5g 或一小块固体 NaOH 调节调 pH 至 7.0， NaCl 10g 加 H2O 至终体积 1000 ml，高压灭菌 5. 含琼脂的 LB 培养基 15g 加入 1L LB 中，高压灭菌，轻轻旋动使琼脂溶解，冷 至 50 度左右浇板或加入抗生素后浇板。 6. TE（pH8.0） 1M Tris(pH8.0) 10 ml 溶于 H2O 至终体积 1000 ml, 0. 5M EDTA(pH8.0) 2 ml 高压灭菌 7. 1M Tris(pH8.0) 121.1g Tris 溶于 800 ml H2O，浓盐酸 42 ml 调 pH8.0, 加 入 H2O 至终体积 1000 ml，高压灭菌

8.0. 5MEDTA(pH8.0) 1861 g EDTA溶于800mH2O,磁力剧搅,约20 g NaOh 调pH8.0,加H2O至终体积1000m,高压灭菌 9.10%SDS l0gSDS溶于90mlHO,加热溶解,几滴浓盐酸调pH7.2, 加H2O至终体积100m,无需灭菌 10.2%SDS 10%SDS20ml溶于ddH2O至终体积l00ml 11. 0.4MNaoh l6 g NaOh溶于H2O至终体积100m,高压灭菌 12. AXYGEN质粒小量制备试剂盒

8. 0.5M EDTA(pH8.0) 186.1g EDTA 溶于 800ml H2O，磁力剧搅，约 20g NaOH 调 pH8.0，加 H2O 至终体积 1000ml，高压灭菌 9. 10% SDS 10g SDS 溶于 90ml H2O，加热溶解，几滴浓盐酸调 pH7.2， 加 H2O 至终体积 100ml，无需灭菌 10. 2% SDS 10% SDS 20ml 溶于 ddH2O 至终体积 100ml 11. 0.4M NaOH 1.6g NaOH 溶于 H2O 至终体积 100ml，高压灭菌 12. AXYGEN 质粒小量制备试剂盒