复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_实验一 DNA重组与细胞转化

《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤,东5号楼305室 021-54237329;Ifpan@shmu.edu.cn

《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤，东5号楼305室 021-54237329; lfpan@shmu.edu.cn •1

实验安排 实验一:DNA重组与转化 实验二:重组DNA提取与鉴定 课程负责人:潘銮凤 实验三:细胞总RNA提取及逆转录教师:王松梅(秘书) 实验四:实时荧光定量PCR 邵红霞 实验五: SDS-PAGE 潘銮凤 实验六: Western blot 实验七八:荧光原位杂交

实验安排 •2 实验一：DNA重组与转化 实验二：重组DNA提取与鉴定 实验三：细胞总RNA提取及逆转录 实验四：实时荧光定量 PCR 实验五：SDS-PAGE 实验六：Western Blot 实验七八：荧光原位杂交 课程负责人：潘銮凤 教师：王松梅（秘书） 邵红霞 潘銮凤

分子生物学实验流程图 质粒重组→转化→鉴定→质粒大量扩增→探针制备→杂交 细胞培养一RNA提取一→反转录一实时定量PCR 涂片-荧光原位杂交←组织切片 细胞培养一蛋白提取一浓度测定→→ PAGE+Western Blot ELISA

•3 分子生物学实验流程图 质粒重组 转化 鉴定 质粒大量扩增 探针制备 杂交 细胞培养 RNA提取 反转录 实时定量PCR 涂片-荧光原位杂交 组织切片 细胞培养 蛋白提取 浓度测定 PAGE Western Blot ELISA

实验注意事项 1.实验用品分组(3人一组)标记,放于实验桌上。实验开 始时清点;实验结束,请各组同学将用品归于原位,整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中(如玻璃耗材、部分离心管等,有疑问请咨询带教 老师) 多验开始彍珍乱翻歌! 每组2个盆,价桶,分列放冰,流涔妧级, 固体妧级,束时每组自行清理

实验注意事项 1. 实验用品分组（3人一组）标记，放于实验桌上。实验开 始时清点；实验结束，请各组同学将用品归于原位，整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中（如玻璃耗材、部分离心管等，有疑问请咨询带教 老师） •6 实验开始前请勿乱翻动！ 每组2个盆，1个桶，分别放冰，液体垃圾， 固体垃圾，结束时每组自行清理

2.实验试剂: 常规试剂通常每组一份放在桌上,部分试剂2组一份或 大桌放一管。试剂盒全班一套或两套 需要低温放置的试剂在冰箱下层的冰盆里,需在放在冰盒 中保温,特别是酶,加完要及时放回冰盒 试剂盒一般是全班一套或两套,放在讲台实验桌上,加完 及时返回,同学可相互询问一下试剂的动向 有些常规用试剂(如水,加样 buffer),可室温保存,多 次使用

•7 2. 实验试剂： 常规试剂通常每组一份放在桌上，部分试剂2组一份或一 大桌放一管。试剂盒全班一套或两套 需要低温放置的试剂在冰箱下层的冰盆里，需在放在冰盒 中保温，特别是酶，加完要及时放回冰盒 试剂盒一般是全班一套或两套，放在讲台实验桌上，加完 及时返回，同学可相互询问一下试剂的动向 有些常规用试剂（如水，加样buffer），可室温保存，多 次使用

3.离心机的正确使用:(注意安全和仪器保护) 平衡——15ml:连同离心管套架一起平衡 1.5ml:相同体积,对称位置放置) 离心机盖(包括内盖) 最高速度不能超限 离心时,先调节离心时间,再调节转速。等到 达设定转速并运转正常后再离开。 如需低温离心,请先开机将离心机预冷,离心 间歇阶段关机盖,离心结束,请打开机盖晾千

•8 3. 离心机的正确使用：（注意安全和仪器保护）  平衡—— 15ml：连同离心管套架一起平衡，  1.5ml：相同体积，对称位置放置）  离心机盖（包括内盖）  最高速度不能超限  离心时，先调节离心时间，再调节转速。等到 达设定转速并运转正常后再离开。  如需低温离心，请先开机将离心机预冷，离心 间歇阶段关机盖，离心结束，请打开机盖晾干

4.加样枪 Pipet的正确使用 选用合适量程的加样器 正确进行刻度调节(不能旋过头) 清洁爱护加样器 吸样品和加样品时的手势合理 当加样枪转到它的最高体积时,绝对不能再往前转,不然 这把加样枪就会被损坏,完全不能再用

4. 加样枪Pipet的正确使用  选用合适量程的加样器  正确进行刻度调节（不能旋过头）  清洁爱护加样器  吸样品和加样品时的手势合理 当加样枪转到它的最高体积时，绝对不能再往前转，不然 这把加样枪就会被损坏，完全不能再用

网对于最大体积为10山的加样枪1表示10山0表示1叫 0表示0y 00 0 对于100加样枪则, 表示10u。0表示10,0表示 对于10的加样枪, 表示100Q0表示10u0表示⑩山

对于最大体积为 10 l 的加样枪， 表示 10 l， 表示 1 l， 表示 0.1 l 对于 100 l 的加样枪则， 表示 100 l， 表示 10 l， 表示 1 l 对于 1000 l 的加样枪， 表示 1000 l， 表示 100 l， 表示 10 l 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1

加样枪的保护 1.吸取样品时,加样枪不要碰到管口或瓶壁 2.吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时,要慢吸快放 3.刻度调试和清洗消毒

加样枪的保护： 1. 吸取样品时，加样枪不要碰到管口或瓶壁 2. 吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时，要慢吸快放 3. 刻度调试和清洗消毒

A 准确吸取液体体积 C 顶部 1档 2档 正向操作 排气 吸液 放液 排空 保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费

准确吸取液体体积 保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费