复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_应用篇 第一章 转基因动物与基因组靶向编辑

应用篇第一章 转基因动物与基因组靶向编辑

应用篇 第一章 转基因动物与基因组靶向编辑

帶有大鼠生长激素 基因的转基因小鼠 正常小鼠 世界首只转基因灵长类动物 转基因猴安迪(2000) 世界第一只转基因动物(1982) 2018年广州生物院等构建出世界 首个基因敲除体细胞克隆狗模型

带有大鼠生长激素 基因的转基因小鼠 正常小鼠 世界第一只转基因动物（1982） 世界首只转基因灵长类动物 —-转基因猴安迪（2000） 2018年广州生物院等构建出世界 首个基因敲除体细胞克隆狗模型

第一节转基因动物 Transgenic Animals 用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内, 在动物体内得以表达并能稳定传代的一类动物。 制造产品、改良生命、研究手段

第一节 转基因动物 Transgenic Animals 用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内, 在动物体内得以表达并能稳定传代的一类动物。 制造产品、改良生命、研究手段

转基因小鼠一般实验程序 ①制备转基因构件,准备实验动物和受精卵 ②将转基因构件转入受精卵 ③受精卵移植入假孕母鼠输卵管或子宫 ④鉴定转基因阳性鼠

转基因小鼠一般实验程序 ①制备转基因构件，准备实验动物和受精卵 ②将转基因构件转入受精卵 ③受精卵移植入假孕母鼠输卵管或子宫 ④鉴定转基因阳性鼠

以基因工程过程来分: 上游基因改造和载体构建 中游基因转移、胚胎移植 下游转基因动物的筛选及建系

以基因工程过程来分: *上游—基因改造和载体构建 * 中游—基因转移、胚胎移植 * 下游—转基因动物的筛选及建系

1.上游基因改造和载体构建 外源基因:完整的转录单位,由顺式作用元件( cis element) 或称调控元件( regulatory element)、结构/目的基因 ( structural gene)和转录终止信号( polyA)组成 报告基因( reporter gene)或报告序列( reporter sequence):在表达载体中引入易于检测的提示重组体存 在的基因。LaCZ、AP、LUC、GFP等 融合基因( fusion gene):将不同来源的结构基因、非编 码序列、报告基因和表达调控序列重组成杂合单元

外源基因: 完整的转录单位, 由顺式作用元件(cis element) 或称调控元件( regulatory element)、结构/目的基因 （structural gene) 和转录终止信号（polyA)组成 报告基因 (reporter gene) 或报告序列（reporter sequence): 在表达载体中引入易于检测的提示重组体存 在的基因。LacZ、AP、 LUC、GFP等 融合基因 (fusion gene): 将不同来源的结构基因、非编 码序列、报告基因和表达调控序列重组成杂合单元 1. 上游—基因改造和载体构建

2.中游基因转移、胚胎移植 基因导入技术:物理、化学和生物学方法 1)显微注射法( microinjection) 2)胚胎干细胞法( embryonic stem cells,ES细胞) 3)反转录病毒感染法 4)精子载体法 5)体细胞核移植法

2. 中游—基因转移、胚胎移植 基因导入技术：物理、化学和生物学方法 1) 显微注射法 （microinjection) 2) 胚胎干细胞法（embryonic stem cells, ES细胞） 3) 反转录病毒感染法 4) 精子载体法 5) 体细胞核移植法

1)DNA显微注射 DNA注射针 精原核 卵原核 持卵管

1) DNA显微注射 精原核 卵原核 DNA注射针 持卵管

傅/2)胚胎干细胞法 embryonic stem cells, ES细胞) 胚胎干细胞 8838°胚泡 Oo 9oo° 培养皿中培养 分离内层细胞团 加饲养层细胞培养 胰蛋白酶解离

2) 胚胎干细胞法 （embryonic stem cells, ES细胞） 胚泡 培养皿中培养 分离内层细胞团 胰蛋白酶解离 加饲养层细胞培养 胚胎干细胞

/2)胚胎干细胞法 外源基因DNA 磷酸钙-DNA共沉淀法 反转录病毒感染法 电穿孔法 胚胎干细胞一筛选 微注射 囊胚一→原肠胚一→转基因动物

2) 胚胎干细胞法 外源基因DNA 胚胎干细胞 磷酸钙-DNA共沉淀法 反转录病毒感染法 电穿孔法 囊胚 原肠胚 微注射 转基因动物 筛选