复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学资源_实验五、六 蛋白制备、浓度测定、PAGE电泳及Western Blot——实验准备

实验五、六蛋白制备、浓度测定、PAGE电泳及 Western blot 每组准备(共10组) 6.考马斯亮蓝染色液 1.HL60细胞×1瓶 7.脱色液I 2.滴管×6 8.脱色液Il 3.刻度移液管5ml×3;,10ml×5 9.一抗:兔抗人cMc多克隆抗体 4.15ml离心管×3及离心管架 10.二抗:AP标记的羊抗兔IgG抗体 5.1.5m离心管×10及离心管架 11.显色底物:NBT/BCIP 6.20ul、100ul、1000ud枪头及枪 12.ddH2O水洗瓶 7.垂直电泳槽及配胶系统1套 13.备用试剂、器材若干 8.美工刀、直尺、一次性手套×2、混 匀板、剪刀、鸭嘴镊、胶布 仪器 9.配胶用小烧杯×2 1.低温高速1.5m离心机 10.废液桶、废液盆、记号笔、吸耳球 2.室温高速1.5ml离心机 11.10ml、100ml量筒;玻璃平皿×5 3.低温低速15ml离心机 12.PVDF膜、厚滤纸(2.5×5.2cm)×6 4.沸水浴(内有1.5ml离心管的水漂) 13.1×PBS×12ml 5.电泳仪×3 14.30%丙烯酰胺溶液×13ml 6.半干转移电泳槽×2 15.4×分离胶缓冲液×85ml 7.摇床×2(上铺报纸) 16.4×浓缩胶缓冲液×3.5ml 封口机 17.10%SDS×0.6ml 9.漩涡振荡器 18.10%过硫酸铵×300ul(提前1 天配制并分装,4℃存) 19.ddH2O×20ml 20.4%SDS×0.6ml 21.4×加样缓冲液×20ul 22.1×SDS电泳缓冲液×500m 23.水饱和正丁醇×1.5ml 24.转移缓冲液×85m(需准确) 25.封闭液×50ml(提前1天配制并 分装,4℃存,周二用完后放回冰箱 下周再用或再配少量新的) 26.PBST×150ml 27.检测缓冲液(即缓冲液3)×20m 其中,28-29第二周放 全班共用 1.洗涤用蒸馏水1桶放水池边 2.预染色蛋白 Marker 3.塑料袋若干(放讲台上) 4.甲醇×2瓶 5. TEMED×2瓶

实验五、六 蛋白制备、浓度测定、PAGE 电泳及 Western Blot 一．每组准备（共 10 组） 1． HL60 细胞×1 瓶 2． 滴管×6 3． 刻度移液管 5 ml×3; 10 ml×5 4． 15 ml 离心管×3 及离心管架 5． 1.5 ml 离心管×10 及离心管架 6． 20 ul、100 ul、1000 ul 枪头及枪 7． 垂直电泳槽及配胶系统 1 套 8． 美工刀、直尺、一次性手套×2、混 匀板、剪刀、鸭嘴镊、胶布 9． 配胶用小烧杯×2 10．废液桶、废液盆、记号笔、吸耳球 11．10 ml、100 ml 量筒; 玻璃平皿 ×5 12．PVDF 膜、厚滤纸(2.5×5.2cm)×6 13．1×PBS ×12 ml 14．30％ 丙烯酰胺溶液 ×13 ml 15．4×分离胶缓冲液 ×8.5 ml 16．4×浓缩胶缓冲液 ×3.5 ml 17．10％ SDS ×0.6 ml 18．10％ 过硫酸铵 ×300 ul（提前 1 天配制并分装，4℃存） 19．ddH2O ×20 ml 20．4%SDS ×0.6 ml 21．4×加样缓冲液 ×20 ul 22．1×SDS 电泳缓冲液 ×500 ml 23．水饱和正丁醇 ×1.5 ml 24．转移缓冲液 ×85 ml(需准确) 25．封闭液 ×50 ml（提前 1 天配制并 分装，4℃存，周二用完后放回冰箱， 下周再用或再配少量新的） 26．PBST ×150 ml 27．检测缓冲液（即缓冲液 3）×20 ml 其中，28－29 第二周放 二．全班共用 1． 洗涤用蒸馏水 1 桶放水池边 2． 预染色蛋白 Marker 3． 塑料袋若干（放讲台上） 4． 甲醇 ×2 瓶 5． TEMED ×2 瓶 6． 考马斯亮蓝染色液 7． 脱色液 I 8． 脱色液 II 9． 一抗：兔抗人 c-Myc 多克隆抗体 10．二抗：AP 标记的羊抗兔 IgG 抗体 11．显色底物：NBT/BCIP 12．ddH2O 水洗瓶 13．备用试剂、器材若干 三．仪器 1． 低温高速 1.5 ml 离心机 2． 室温高速 1.5 ml 离心机 3． 低温低速 15 ml 离心机 4． 沸水浴（内有 1.5ml 离心管的水漂） 5． 电泳仪 ×3 6． 半干转移电泳槽 ×2 7． 摇床 ×2（上铺报纸） 8． 封口机 9． 漩涡振荡器