复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_实验七 PVDF膜上蛋白质的鉴定

实验七PVDF膜上蛋白质的鉴定 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330;smwang2@fudan.edu.cn

实验七 PVDF膜上蛋白质的鉴定 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330; smwang2@fudan.edu.cn

在PVDF膜上鉴定蛋白质 1.原理与过程 转膜(半干转移、温法转移) 封闭 一抗结合 耐标记的 酶标或放射性标记二抗结合 第二抗体 显色或放射自显影 一算一抗体 國圈 结合的蛋白质成分 消酸纤维素喜

在PVDF膜上鉴定蛋白质 2

<Western Blots 212 一一子特异蛋白 考马斯亮蓝染色总蛋白 Western Blot检测特异蛋白

考马斯亮蓝染色总蛋白 WesternBlot检测特异蛋白 特异蛋白

前两周实验内容

1.制备SDS聚丙烯酰胺凝胶 电泳芯和制胶器 浓缩胶 压紧滑块 本体 ----- 分离胶 制胶器 5

5 分离胶 浓缩胶 本体 制胶器 1. 制备SDS聚丙烯酰胺凝胶

2.制备细胞总蛋白 HL60细跑 细胞总可溶性蛋白 SDS直接裂解法

2. 制备细胞总蛋白 HL60细胞 SDS直接裂解法 细胞总可溶性蛋白

2.上样电泳 L」L」L」L」L 4 Sample Well 考染 转膜 U Direction migration 电泳结束后凝胶分成两个部分

7 2. 上样电泳 1 2 3 4 考染 转膜 电泳结束后凝胶分成两个部分

3.凝胶的考马斯亮蓝染色(第一部分凝胶)

3. 凝胶的考马斯亮蓝染色（第一部分凝胶）

4.将蛋白质转移到PVDF膜 (第二部分凝胶) 安全盖4 平板阴极(带闭锁 增厚滤纸 丙烯酰胺凝胶 转印膜 增厚滤纸 平板阳极 底座 9

9 4. 将蛋白质转移到PVDF膜 （第二部分凝胶）

5.封闭 10

10 5. 封闭