山东第一医科大学（泰山医学院）：《食品理化检验》课程教学资源（实验指导）葡萄糖的测定

实验教案 姓名徐希柱」 2008~2009学年第二学期时间2009-615节次5-8 课程名称 食品理化检验 授课专业及层次2006级医学检验本科1.2 实验项目 苯酚一硫酸法测定食品中的葡萄糖 实验分组情况 4人/组×18 学时数4学时 实验目的 苯酚硫酸法测定食品中的多糖含量 实验原理 见本教案实验内容、步骤部分 设备与材料 752分光光度计、电子分析天平、移液管、比色皿等：葡萄糖、苯酚、硫 酸等 操作重点 准确加样及吸光度的精确测定 操作难点 比色皿的校正及运用Excel制作标准曲线 操作注意事项 硫酸加入时的时间、滴加方式要一致：电子分析天平使用前进行调校：苯 酚、浓硫酸在加入时要注意安全， ①演示752分光光度计的操作、比色皿的洗涤校正以及运用xc1进行数 教学法 据处理：②学生操作期间注重巡查，发现问题启发学生自行思考，独立解 决：③讨论式总结。 实验内容、步骤、要求及时间分配 一、讲解： 15分钟 苯酚一硫酸法测定食品中的葡萄糖的原理 苯酚一硫酸法测定食品中的葡萄糖的操作步骤及注意事项： 752分光光度计和电子分析天平的使用及注意事项。 二、示教： 10分钟 苯酚、硫酸加入的手法及注意事项：比色皿的严格校正 运用Excel制作标准曲线， 三、指导学生实验。 170分 钟 四、小结本次实验。 5分钟

1 实 验 教 案 姓名_徐希柱_ 2008 ～2009 学年第 二学期 时间__2009-6-15_ 节次_5－8_ 课程名称 食品理化检验 授课专业及层次 2006 级医学检验本科 1.2 实验项目 苯酚-硫酸法测定食品中的葡萄糖 实验分组情况 4 人/组×18 学时数 4 学时 实验目的 苯酚-硫酸法测定食品中的多糖含量 实验原理 见本教案实验内容、步骤部分 设备与材料 752 分光光度计、电子分析天平、移液管、比色皿等；葡萄糖、苯酚、硫 酸等 操作重点 准确加样及吸光度的精确测定 操作难点 比色皿的校正及运用 Excel 制作标准曲线 操作注意事项 硫酸加入时的时间、滴加方式要一致；电子分析天平使用前进行调校；苯 酚、浓硫酸在加入时要注意安全。 教学法 ①演示 752 分光光度计的操作、比色皿的洗涤校正以及运用 Excel 进行数 据处理；②学生操作期间注重巡查，发现问题启发学生自行思考，独立解 决；③讨论式总结。 实验内容、步骤、要求及时间分配 一 、 讲 解 ： 苯酚-硫酸法测定食品中的葡萄糖的原理 苯酚-硫酸法测定食品中的葡萄糖的操 作步骤 及注 意事 项； 752 分光光度计和 电子 分析 天平的 使用 及注 意事 项。 二 、 示教： 苯 酚 、 硫 酸 加 入的 手法及 注意 事项 ；比 色皿的 严格 校正 ； 运 用 Excel 制作标准曲线。 三 、 指 导 学 生 实验 。 四 、 小 结 本 次 实验 。 15 分钟 10 分钟 170 分 钟 5 分钟

附：苯酚一硫酸法测定食品中多糖含量原理、步骤及注意事项 一、[实验原理] 保健食品中的粗多糖用乙醇沉淀，再用碱性硫酸铜沉淀分离后， 使用硫酸进行水解为葡萄糖，然后与苯酚-硫酸溶液反应显色，于490 波长处测定吸光值，以标准葡萄糖溶液制作标准曲线，比色定量。 二、[操作步骤] 分别吸取40μgml的葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 1.4、1.6、1.8、2.0ml,加去离子水补足2ml。然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5ml。静止10min,摇匀，室温放置20min后于490nm下测 定吸光度。以2.0ml水按同样显色操作为空白，绘制标准曲线。并计 算样品溶液中葡萄糖的含量！ 三、[注意事项] 1注意操作条件的一致性。 2.注意控制时间的一致性。 3.所需比色皿要进行校正。 4严格进行试剂添加（顺序、时间、方式、移液管的使用等） 5.由于实验中应用到苯酚、硫酸等有毒、易腐蚀的物质，因此要注 意实验安全，严格遵守实验规定。 四、讨论总结 各组介绍各项实验结果、实验过程中出现的失误好解决方法，提出 尚存的疑惑，供大家分析讨论。 五、思考题 1.实验中对于使用的752分光光度计，我们为何进行3次调零？每 次调零的意义？

2 附：苯酚-硫酸法测定食品中多糖含量原理、步骤及注意事项 一、[实验原理] 保健食品中的粗多糖用乙醇沉淀，再用碱性硫酸铜沉淀分离后， 使用硫酸进行水解为葡萄糖，然后与苯酚-硫酸溶液反应显色，于 490nm 波长处测定吸光值，以标准葡萄糖溶液制作标准曲线，比色定量。 二、[操作步骤] 分别吸取 40μg/ml 的葡萄糖溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、 1.4、1.6、1.8、2.0ml，加去离子水补足 2ml。然后加入 6％苯酚 1.0ml 及浓硫酸 5ml。静止 10min，摇匀，室温放置 20min 后于 490nm 下测 定吸光度。以 2.0ml 水按同样显色操作为空白，绘制标准曲线。并计 算样品溶液中葡萄糖的含量。 三、[注意事项] 1.注意操作条件的一致性。 2.注意控制时间的一致性。 3.所需比色皿要进行校正。 4.严格进行试剂添加（顺序、时间、方式、移液管的使用等） 5.由于实验中应用到苯酚、硫酸等有毒、易腐蚀的物质，因此要注 意实验安全，严格遵守实验规定。 四、讨论总结 各组介绍各项实验结果、实验过程中出现的失误好解决方法，提出 尚存的疑惑，供大家分析讨论。 五、思考题 1.实验中对于使用的 752 分光光度计，我们为何进行 3 次调零？每 次调零的意义？

2在加入硫酸时为何准确计时？为何对于硫酸的滴加方式进行严 格要求？ 3.我们对于显色有何要求？ 4.在运用Exce1对数据进行处理、制作标准曲线时，应当怎样看 待结果？其与传统的画图法有何区别？ 5.使用分光光度计方法最应该注意的要求是什么？ [实验教学后记 1.实验的结果还是比较好的，同学们对于不同的实验样品进行了 较为准确的测定。尤其是样品浓度在25ugmL附近区域的更加准确。 2.我们对于此次实验的结果进行了具体的考核，标准如下： ①.试剂添加（顺序、时间、方式、移液管的使用等） 25分 ②分光光度计的使用(752的校正、调节、比色皿的正确使用等)25 分 ③R2值：25分 R2值 ≥0.995 0.995-0.99 0.99-0.9 0.9-0.8 40% 得分 25 20 15 10 5 3在数据处理上，以前都是用绘图用的米格纸手工绘制标准曲线。 学生对使用Excl进行数据处理很感兴趣，只是大部分同学对于公式 中y=kx+b、以及R2值所代表的意义还没理解透彻

3 2.在加入硫酸时为何准确计时？为何对于硫酸的滴加方式进行严 格要求？ 3.我们对于显色有何要求？ 4. 在运用 Excel 对数据进行处理、制作标准曲线时，应当怎样看 待结果？其与传统的画图法有何区别？ 5. 使用分光光度计方法最应该注意的要求是什么？ [实验教学后记] 1.实验的结果还是比较好的，同学们对于不同的实验样品进行了 较为准确的测定。尤其是样品浓度在 25μg/mL 附近区域的更加准确。 2.我们对于此次实验的结果进行了具体的考核，标准如下： ①.试剂添加（顺序、时间、方式、移液管的使用等） 25 分 ②分光光度计的使用（752 的校正、调节、比色皿的正确使用等）25 分 ③R2 值： 25 分 R2 值 ≥0.995 0.995~0.99 0.99~0.9 0.9~0.8 ＜0.8 得分 25 20 15 10 5 ④葡萄糖含量： 25 分 葡萄糖含量 ≤10％ 10％~20％ 20％~30％ 30％~40％ ＞40％ 得分 25 20 15 10 5 3.在数据处理上，以前都是用绘图用的米格纸手工绘制标准曲线。 学生对使用 Excel 进行数据处理很感兴趣，只是大部分同学对于公式 中 y=kx+b、以及 R2 值所代表的意义还没理解透彻