山东第一医科大学（泰山医学院）：《食品理化检验》课程教学资源（PPT课件）第八章 霉菌毒素检验（3.3-3.7）

第一节概述 霉菌及霉菌毒素 命名及分类产生条件毒性及危害 第八章（一) 第二节黄曲霉毒素 第三节赭曲霉毒素 概述TLCE孔TSA HPLC微柱筛选法 概述TLC

第八章（一） 第一节概述 霉菌及霉菌毒素 命名及分类 产生条件 毒性及危害 第二节黄曲霉毒素 概述 TLC ELISA HPLC 微柱筛选法 第三节赭曲霉毒素 概 述 TLC 第八章（一）

课后复习 食品菌相 天然食品中常检出AFTB1、AFTB2、 AFTG1、AFTG2、FATM1,按照结构分为 B族、G族；毒性。 ■酶联免疫吸附测定原理

课后复习 ◼ 食品菌相 ◼ 天然食品中常检出AFTB1、AFTB2、 AFTG1、AFTG2、FATM1，按照结构分为 B族、G族；毒性。 ◼ 酶联免疫吸附测定原理

概述 概述 ELISA 第六节T-2毒素 第四节展青霉素 双向薄层扫描 第八章（二） 概述 分析方法 第七节玉米赤霉烯酮 第五节DON、NIV 薄层色谱 ELISA

第八章（二） 第四节展青霉素 概 述 双向薄层扫描 第五节DON、NIV 薄层色谱 ELISA 第六节T-2毒素 概 述 ELISA 第七节玉米赤霉烯酮 概 述 分析方法 第八章（二）

第三节赭曲霉毒素A的检验 ■3.1概述 ■3.2薄层色谱法

第三节 赭曲霉毒素A的检验 ◼ 3.1 概述 ◼ 3.2 薄层色谱法

3.1概述 理化性质：赭曲霉毒素(ochratoxin)是由曲霉菌和青 霉属的几个种属产生的有毒代谢产物。基本结构是异 香豆素连接到B-苯丙氨酸上的衍生物，有A、B、C、D 四种化合物。其中赭曲霉毒素A(OTA)最重要。 ■OTB没有氯元素，OTC是A的乙酯，OTD是4-羟基A。 ■OTA酸性条件下溶于苯、三氯甲烷和稀碳酸氢钠溶液， 加碱成盐，其盐溶于水。 。 主要来源：寒冷条件下由纯绿青霉产生，温暖气候下 由赭曲霉产生。谷物、大豆和香辛料，特别是红辣椒 易受污染。动物饲料优甚

3.1 概述 ◼ 理化性质：赭曲霉毒素（ochratoxin）是由曲霉菌和青 霉属的几个种属产生的有毒代谢产物。基本结构是异 香豆素连接到β-苯丙氨酸上的衍生物，有A、B、C、D 四种化合物。其中赭曲霉毒素A （OTA）最重要。 ◼ OTB没有氯元素，OTC是A的乙酯，OTD是4-羟基A。 ◼ OTA酸性条件下溶于苯、三氯甲烷和稀碳酸氢钠溶液， 加碱成盐，其盐溶于水。 ◼ 主要来源：寒冷条件下由纯绿青霉产生，温暖气候下 由赭曲霉产生。谷物、大豆和香辛料，特别是红辣椒 易受污染。动物饲料优甚

与人体健康关系：存在于动物的肾、肝、肌肉和血液 中，猪是最敏感的动物，肾是主要靶器官。1956年巴 尔干地方性肾病。特定的癌症基因变异，p53「龙胆 泻肝汤（丸）」，原药方以木通入药，至1983年因木 通资源短缺，中国大陆地方标准便以关木通代替木通。 关木通是马兜铃科草药，含马兜铃酸，2003年底。 ■卫生标准：食品中没有限量标准。 ■分析方法：薄层色谱法、HPLC、ELISA

◼ 与人体健康关系：存在于动物的肾、肝、肌肉和血液 中，猪是最敏感的动物，肾是主要靶器官。1956年巴 尔干地方性肾病。特定的癌症基因变异，p53 「龙胆 泻肝汤（丸）」，原药方以木通入药，至1983年因木 通资源短缺，中国大陆地方标准便以关木通代替木通。 关木通是马兜铃科草药，含马兜铃酸，2003年底 。 ◼ 卫生标准：食品中没有限量标准。 ◼ 分析方法：薄层色谱法、HPLC、ELISA

3.2薄层色谱法 原理：用三氯甲烷-磷酸(0.1ol/L)或石油醚-甲醇/水 提取样品中OTA,净化浓缩后薄板展开，根据样品在 紫外光灯下，OTA标准点相应处产生黄绿色荧光的强 度，与标准比较确定含量。 ■样品处理：样品用三氯甲烷和0.1mol/L磷酸提取，OTA 在酸性条件下进入有机相，过滤加碳酸氢钠溶液碱化， OTA进入水相分离后碳酸氢钠水层用稀盐酸溶液调节 pH2-3,用三氯甲烷振摇提取分层后，挥干三氯甲烷加 入苯-乙腈(98+2)溶解残渣，供TLC用

3.2 薄层色谱法 ◼ 原理：用三氯甲烷-磷酸（0.1mol/L）或石油醚-甲醇/水 提取样品中OTA，净化浓缩后薄板展开，根据样品在 紫外光灯下，OTA标准点相应处产生黄绿色荧光的强 度，与标准比较确定含量。 ◼ 样品处理：样品用三氯甲烷和0.1mol/L磷酸提取，OTA 在酸性条件下进入有机相，过滤加碳酸氢钠溶液碱化， OTA进入水相分离后碳酸氢钠水层用稀盐酸溶液调节 pH2-3，用三氯甲烷振摇提取分层后，挥干三氯甲烷加 入苯-乙腈（98＋2）溶解残渣，供TLC用

测定方法：滴加标准、样品、样品十标准三个点。先 用横展剂乙醚或乙醚.甲醇-水(94十5+1)，将薄层板 纵展2-3cm,此时OTA不动而杂质向前移动。取出挥干 再将该薄层板靠近标准点的长边置于同一展开槽内的 溶剂进行横展，使杂质偏离点样点，与OTA分离，避 免了杂质荧光的干扰。然后将经横展后的薄层板纵展， 纵展剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(6十3+1.2+0.06) 或甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6十3十1.4)，苯-冰乙酸(9十 1)。365nm下紫外观察，若与标准点处有荧光点则估 计稀释倍数，再点样。同时做确证实验

◼ 测定方法：滴加标准、样品、样品＋标准三个点。先 用横展剂乙醚或乙醚-甲醇-水（94＋5＋1），将薄层板 纵展2-3cm，此时OTA不动而杂质向前移动。取出挥干， 再将该薄层板靠近标准点的长边置于同一展开槽内的 溶剂进行横展，使杂质偏离点样点，与OTA 分离，避 免了杂质荧光的干扰。然后将经横展后的薄层板纵展， 纵展剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（6＋3＋1.2＋0.06） 或甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6＋3＋1.4），苯-冰乙酸（9＋ 1）。365nm下紫外观察，若与标准点处有荧光点则估 计稀释倍数，再点样。同时做确证实验

确证实验：用碳酸氢钠乙醇溶液喷洒薄层色谱板，干 燥于长波紫外灯下观察，这时OTA荧光点应由黄绿色 变为蓝色，而且荧光强度有所增加。 ■方法说明：点样量若超过了硅胶的吸附能力，原点上 的杂质和残留的溶剂在横展中可将OTA点横向拉长， 可根据荧光强度于标准对比，估计减少的加样体积或 所需稀释的倍数；OTA标准液应用黑纸遮光；最低检 出限为10ppb

◼ 确证实验：用碳酸氢钠乙醇溶液喷洒薄层色谱板，干 燥于长波紫外灯下观察，这时OTA荧光点应由黄绿色 变为蓝色，而且荧光强度有所增加。 ◼ 方法说明：点样量若超过了硅胶的吸附能力，原点上 的杂质和残留的溶剂在横展中可将OTA点横向拉长， 可根据荧光强度于标准对比，估计减少的加样体积或 所需稀释的倍数；OTA标准液应用黑纸遮光；最低检 出限为10ppb

第四节展青霉素的检验 ■4.1概述 ■4.2双向薄层扫描测定法

第四节 展青霉素的检验 ◼ 4.1 概述 ◼ 4.2 双向薄层扫描测定法