《药物分析》课程授课教案（讲稿）第十四章 维生素类药物的分析

讲禾稿课程名称：药物分析课程编号：v230508授课学期：第六学期11级药学授课班级：霍文任课教师：河北联合大学药学院1

1 讲 稿 课程名称： 药物分析 课程编号： y230508 授课学期： 第六学期 授课班级： 11 级药学 任课教师： 霍文 河北联合大学 药学院

首页课程名称：《药物分析》第12 周，第_22讲次摘要第十四章维生素类药物的分析授课题目（章、节）第一节维生素A的分析第二节维生素B1的分析【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。掌握维生素A、B1的鉴别原理与方法。掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法【重点】维生素A、BI的鉴别原理与方法。三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法【难点】掌三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法内容【本讲课程的引入】维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。人体不能自行合成维生素。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。板书“维生素类药物的分析”。一、维生素A（一）结构特点与分析方法之间的关系CHCHHCH20RCH3CH31.共轭多烯结构：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进行鉴别，采用紫外分光光度法进行含量测定。天然维生素A是全反式维生素A。2.结构式中R的不同，可以形成维生素A醇或其酯。临床上多用其醋酸酯和棕榈酸酯。（二）鉴别实验1.三氯化锑反应：加饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液，即显蓝色，渐变紫红色。2.紫外吸收光谱法：在300～400nm范围内扫描，应仅在326nm处有单一吸收峰：经水浴加热30秒，应在348、367、389nm处有三个尖锐的吸收峰。2

2 首页 课程名称：《药物分析》 第 12 周，第 22 讲次 摘 要 授课题目（章、节） 第十四章 维生素类药物的分析 第一节 维生素 A 的分析 第二节维生素 B1 的分析 【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。 掌握维生素 A、B1 的鉴别原理与方法。掌握三点校正法测定维生素 A 的原理、测定方法与计 算方法 【重 点】维生素 A、B1 的鉴别原理与方法。三点校正法测定维生素 A 的原理、测定方法与 计算方法 【难 点】掌三点校正法测定维生素 A 的原理、测定方法与计算方法 内 容 【本讲课程的引入】维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。 人体不能自行合成维生素。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症， 而影响人体的正常生理机能。 板书“维生素类药物的分析”。 一、维生素 A （一）结构特点与分析方法之间的关系 CH2OR CH3 3 CH3 CH CH3 CH3 1．共轭多烯结构：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进行鉴别，采用紫外分光 光度法进行含量测定。天然维生素 A 是全反式维生素 A。 2．结构式中 R 的不同，可以形成维生素 A 醇或其酯。临床上多用其醋酸酯和棕榈酸 酯。 （二）鉴别实验 1.三氯化锑反应：加饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液，即显蓝色，渐变紫红色。 2.紫外吸收光谱法：在 300～400nm 范围内扫描，应仅在 326nm 处有单一吸收峰；经 水浴加热 30 秒，应在 348、367、389nm 处有三个尖锐的吸收峰

3.薄层色谱法：见表（三）维生素A含量测定维生素A含量测定方法有紫外分光光度法和三氯化锑比色法，前者是法定方法，后者多用于食品或饲料中的维生素A的测定。中国药典采用三点校正法。1为何要采用三点校正法？维生素A原料药中常混有杂质，如维生素A2、维生素As、维生素A的氧化产物、鲸醇以及维生素A的异构体，这些杂质在维生素A的最大吸收波长附近有吸收，干扰维生素A的测定。采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。2.测定原理该法基于两点：1）在310～340nm范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸收度下降。2）物质对光吸收呈加和性。波长的选择：一点选在维生素A的最大吸收波长处（入1），其它两点选在入，的两侧。第一法（等波长差法）的三个波长为入，=328nm、入2=316nm、入s=340nm；第二法（等吸收比法），使Az2=Ax3=6/7Ax，则三个波长为入，=325nm、入2=310nm、入。=334nm。3.测定方法首先判断用哪个吸收度进行含量计算。第一法：供试液浓度为9～15IU/ml，溶剂为环已烷，在300、316、328、340、360nm五个波长处测定吸收度。1）最大吸收波长在326～329nm之间，计算吸收度比值A:/A328，并与规定值相减，差值不超过土0.02，则用A328计算含量：E 11* =A/CLIU/g = E 1c1× 1900IU/丸=IU/gXg/丸=IU/g×WIU/丸标示量%=X100%标示量AXDX1900XW或：标示量%=X100%W×100XL×标示量3

3 3.薄层色谱法：见表 （三） 维生素 A 含量测定 维生素 A 含量测定方法有紫外分光光度法和三氯化锑比色法，前者是法定方法，后 者多用于食品或饲料中的维生素 A 的测定。中国药典采用三点校正法。 1．为何要采用三点校正法？ 维生素 A 原料药中常混有杂质，如维生素 A2、维生素 A3、维生素 A 的氧化产物、鲸 醇以及维生素 A 的异构体，这些杂质在维生素 A 的最大吸收波长附近有吸收，干扰 维生素 A 的测定。采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。 2．测定原理 该法基于两点：1）在 310～340nm 范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸 收度下降。 2）物质对光吸收呈加和性。 波长的选择：一点选在维生素 A 的最大吸收波长处（λ1），其它两点选在λ1 的两侧。 第一法（等波长差法）的三个波长为λ1=328nm、λ2=316nm、λ3=340nm；第二法（等吸收 比法），使 Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1，则三个波长为λ1=325nm、λ2=310nm、λ3=334nm。 3．测定方法 首先判断用哪个吸收度进行含量计算。 第一法：供试液浓度为 9～15IU/ml，溶剂为环己烷，在 300、316、328、340、360nm 五个波长处测定吸收度。 1）最大吸收波长在 326～329nm 之间，计算吸收度比值 Ai /A328，并与规定值相减， 差值不超过±0.02，则用 A328 计算含量： E 1cm 1% =A/CL IU/g = E 1cm 1%× 1900 IU/丸 = IU/g ×g/丸 = IU/g× W IU/丸 标示量% =- ×100% 标示量 A×D×1900×W 或： 标示量% = - ×100% W×100×L×标示量

2）如果最大吸收波长在326～329nm之间，5个波长下的差值有一个或几个超过土0.02，这时先计算A328（校正）：As2e（校正）=3.52(2 Aaz8-As16- As40)As28（校正）-As28再计算一X100%Aa28若所得的数值在±3%，则仍用A328计算含量：若所得的数值在-15%～-3%之间，则需用A28（校正）计算含量；若所得的数值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波长不在326329nm之间，则应采用第二法（皂化法）测定。二、维生素B（一）、结构特点与分析方法之间的关系1.氨基嘧啶环和噻唑环：具有硫色素反应，此反应专属性强，用于鉴别和含量测定。具杂环的沉淀反应，与生物碱沉淀剂反应，产生沉淀，用于鉴别与含量测定。2.共轭体系：具紫外吸收，用于含量测定。3.盐酸根：呈氯化物的反应，用于鉴别。H.COFCI,HC1CH维生素Bi（二）鉴别反应1.硫色素荧光反应维生素B1在碱性溶液在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素，于正丁醇中显蓝色荧光。2.沉淀反应3.氯化物反应4.硫元素反应5.IR（三）含量测定维生素B及其制剂的测定方法有非水溶液滴定法、紫外分光光度法、硅钨酸重量法和硫色素荧光法。中国药典（2010年版）采用非水溶液滴定法测定原料药，采用紫外分光光度法测定片剂和注射液。4

4 2）如果最大吸收波长在 326～329nm 之间，5 个波长下的差值有一个或几个超过± 0.02，这时先计算 A328（校正）： A3 28（校正）=3.52（2 A328 - A316 - A3 40） A3 28（校正）- A328 再计算 -×100% A328 若所得的数值在±3%，则仍用 A328 计算含量； 若所得的数值在-15%～-3%之间，则需用 A328（校正）计算含量； 若所得的数值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波长不在 326～329nm 之 间，则应采用第二法（皂化法）测定。 二、维生素 B1 （一）、结构特点与分析方法之间的关系 1．氨基嘧啶环和噻唑环：具有硫色素反应，此反应专属性强，用于鉴别和含量测定。 具杂环的沉淀反应，与生物碱沉淀剂反应，产生沉淀，用于鉴别与含量测定。 2．共轭体系：具紫外吸收，用于含量测定。 3．盐酸根：呈氯化物的反应，用于鉴别。 N N NH3 N S + OH CH3 H3C Cl,HCl 维生素 B1 （二）鉴别反应 1.硫色素荧光反应 维生素 B1 在碱性溶液在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素，于正丁醇中显 蓝色荧光。 2.沉淀反应 3.氯化物反应 4.硫元素反应 5.IR （三）含量测定 维生素 B1 及其制剂的测定方法有非水溶液滴定法、紫外分光光度法、硅钨酸重量法 和硫色素荧光法。中国药典（2010 年版）采用非水溶液滴定法测定原料药，采用紫外分 光光度法测定片剂和注射液

1.非水溶液滴定法：分子中有两碱性基团，均可与高氯酸作用，其摩尔比为1：2，分子量为337.27，滴定度为16.86mg/ml。2.紫外分光光度法：用盐酸溶液（9→1000）将维生素B片粉中的维生素B溶出，经过滤、稀释后于246nm测定吸收度，计算含量。WAXDX标示量%=×100%E1×100×W×标示量【本讲课程的小结】今天我们主要讲了维生素A、B1药物的典型结构特点、理化性质和鉴别含量测定基本原理与方法。希望同学们重点学习。【本讲课程的作业】1.维生素Bi的鉴别方法是A三氯化铁反应B.硫色素反应C柯柏反应D.与碱性酒石酸铜试液反应2.可用紫外分光光度法测定含量的药物有A.维生素A丸剂B.丙酸睾酮C.维生素AD.维生素B片3.简述维生素A三点校正法的原理，波长选择方法。5

5 1．非水溶液滴定法：分子中有两碱性基团，均可与高氯酸作用，其摩尔比为 1∶2， 分子量为 337.27，滴定度为 16.86mg/ml。 2．紫外分光光度法：用盐酸溶液（9→ 1000）将维生素 B1 片粉中的维生素 B1 溶出， 经过滤、稀释后于 246nm 测定吸收度，计算含量。 A × D × W 标示量% = -× 100% E 1cm 1%×100×W×标示量 【本讲课程的小结】今天我们主要讲了维生素 A、B1 药物的典型结构特点、理化性质 和鉴别含量测定基本原理与方法。希望同学们重点学习。 【本讲课程的作业】1．维生素B1的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 2. 可用紫外分光光度法测定含量的药物有 A. 维生素A丸剂 B. 丙酸睾酮 C. 维生素A D.维生素B1片 3.简述维生素 A 三点校正法的原理，波长选择方法

课程名称：《药物分析》第13周，第23讲次摘要第十四章维生素类药物的分析授课题目（章、节）第三节维生素C的分析第四节维生素D的分析（自学）第五节维生素E的分析【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握维生素C、E鉴别原理和方法，熟悉维生素E的GC含量测定法，了解维生素D的HPLC含量测定法。掌握维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。【重】点】维生素C、E鉴别原理和方法，维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。【难点】维生素C、E鉴别原理和方法，维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。内容【本讲课程的引入】本章围绕维生素类药的化学结构理化性质和分析方法之间的关系，结合中国药典，重点讲解本类药物的鉴别、检查和含量测定的原理和方法。板书“维生素C的分析”。“维生素E的分析”【本讲课程的内容】三、维生素 C（一）、结构特点与分析方法之间的关系H...OHHOOH OH维生素 C1.烯二醇结构：具有强环原性，可发生氧化还原反应，用于鉴别和含量测定。2.与糖类似的结构：具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别。3.旋光性4.酸性5.水解性6.紫外吸收特性（二）鉴别反应与AgNO,反应6

6 课程名称：《药物分析》 第 13 周，第 23 讲次 摘 要 授课题目（章、节） 第十四章 维生素类药物的分析 第三节 维生素 C 的分析 第四节维生素 D 的分析（自学） 第五节维生素 E 的分析 【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握维生素 C、E 鉴别原理和方法，熟悉维生素 E 的 GC 含量测定法，了解维生素 D 的 HPLC 含量测定法。掌握维生素 C 碘量法的测定原理、方法与注 意事项。 【重 点】维生素 C、E 鉴别原理和方法，维生素 C 碘量法的测定原理、方法与注意事项。 【难 点】维生素 C、E 鉴别原理和方法，维生素 C 碘量法的测定原理、方法与注意事项。 内 容 【本讲课程的引入】本章围绕维生素类药的化学结构理化性质和分析方法之间的关 系，结合中国药典，重点讲解本类药物的鉴别、检查和含量测定的原理和方法。 板书“维生素 C 的分析”。“维生素 E 的分析” 【本讲课程的内容】 三、维生素 C （一）、结构特点与分析方法之间的关系 O HO H OH OH OH O 维生素 C 1．烯二醇结构：具有强环原性，可发生氧化还原反应，用于鉴别和含量测定。 2.与糖类似的结构：具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别。 3.旋光性 4.酸性 5.水解性 6.紫外吸收特性 （二）鉴别反应 与 AgNO3 反应

与2,6－二氯靛酚反应与碱性酒石酸铜反应与KMnO.反应糖类的反应UV法鉴别243nm薄层色谱法ChP2010采用薄层色谱法对维生素C制剂进行鉴别（三）杂质检查药物检查项目检查方法维生素C有色杂质分光光度法（四）含量测定维生素C可采用碘量法、2，6-二氯靛酚法、比色法、紫外分光光度法和HPLC法。其中碘量法是维生素C原料及其制剂的法定方法。1.碘量法原理：维生素C具有较强的还原性，在醋酸性条件下，可被碘定量的氧化。讨论：醋酸的作用：维生素C再酸性介质中受空气中氧的氧化速度减慢。加新沸过的冷水：减少水中溶解的氧对测定的影响。2.2，6-二氯靛酚滴定法原理：维生素C具有较强的还原性，在酸性条件下，可被2，6-二氯靛酚氧化。指示终点方法的特点：在酸性溶液中，氧化型的2，6-二氯靛酚为红色，当与维生素C反应后，即转变为无色的酚亚胺（还原型），因此，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定至溶液显玫瑰红色时，即为终点，无需另加指示剂。3.HPLC方法离子交换色谱法离子对色谱法分配色谱法（正、反相）对象、制剂、生物样品、果汁四、维生素D（自学）是一类抗伺病维生素的总称目前已知的维生素D类物质至少有十种之多，它们都是笛醇的衍生物。7

7 与 2,6 - 二氯靛酚反应 与碱性酒石酸铜反应 与 KMnO4 反应 糖类的反应 UV 法鉴别 243nm 薄层色谱法 ChP2010 采用薄层色谱法对维生素 C 制剂进行鉴别 （三） 杂质检查 药物 检查项目 检查方法 维生素 C 有色杂质 分光光度法 （四） 含量测定 维生素 C 可采用碘量法、2，6-二氯靛酚法、比色法、紫外分光光度法和 HPLC 法。其中碘量法是维生素 C 原料及其制剂的法定方法。 1．碘量法 原理：维生素 C 具有较强的还原性，在醋酸性条件下，可被碘定量的氧化。 讨论：醋酸的作用：维生素 C 再酸性介质中受空气中氧的氧化速度减慢。 加新沸过的冷水：减少水中溶解的氧对测定的影响。 2． 2，6-二氯靛酚滴定法 原理：维生素 C 具有较强的还原性，在酸性条件下，可被 2，6-二氯靛酚氧 化。 指示终点方法的特点：在酸性溶液中，氧化型的 2，6-二氯靛酚为红色， 当与维生素 C 反应后，即转变为无色的酚亚胺（还原型），因此，用 2，6-二氯 靛酚滴定液滴定至溶液显玫瑰红色时，即为终点，无需另加指示剂。 3.HPLC 方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相） 对象 制剂、生物样品、果汁 四、维生素 D（自学）是一类抗佝偻病维生素的总称 目前已知的维生素 D 类物质至少有十种之多，它们都是甾醇的衍生物

1.性状均为无色针状结晶或白色结晶性粉末：无臭，无味：遇光或空气均易变质。2.溶解性维生素D2一在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶：维生素D3一在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。3．不稳定性维生素D2、D3因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均发生氧化而变质，使效价降低，毒性增强。本品对酸也不稳定。4.旋光性维生素Dz具有6个手性碳原子，维生素D有5个手性碳原子五、维生素E（一）、结构特点与分析方法之间的关系CH;CHHaCHACHCH-C-OCH0维生素E1.芳环：具紫外吸收，可用于鉴别。1．乙酰化的酚羟基：水解后生成生育酚，可发生三氯化铁反应和氧化还原反应，用于鉴别。（二）、鉴别反应1.硝酸反应加硝酸，显橙红色2.水解后的三氯化铁反应试剂2，2-联啶，三氯化铁，显血红色。（三）、维生素E中杂质的检查药物检查项目检查方法维生素E酸度以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制游离生育酚硫酸铺滴定法（四）、含量测定测定维生素E的法定方法是GC法，另外还有HPLC法、铈量法、比色法和荧光00

8 1．性状 均为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。 2．溶解性 维生素 D2－在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶； 维生素 D3－在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水 中不溶。 3．不稳定性 维生素 D2、D3 因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均 发生氧化而变质，使效价降低，毒性增强。本品对酸也不稳定。 4．旋光性 维生素 D2 具有 6 个手性碳原子，维生素 D3 有 5 个手性碳原子 五、维生素 E （一）、结构特点与分析方法之间的关系 O O CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 C O CH3 CH3 CH3 CH3 维生素 E 1．芳环：具紫外吸收，可用于鉴别。 1． 乙酰化的酚羟基：水解后生成生育酚，可发生三氯化铁反应和氧化还原反 应，用于鉴别。 （二）、鉴别反应 1.硝酸反应 加硝酸 ，显橙红色 2.水解后的三氯化铁反应 试剂 2，2-联砒啶，三氯化铁，显血红色。 （三）、维生素 E 中杂质的检查 药物 检查项目 检查方法 维生素 E 酸度 以 NaOH 滴定液（0.1mol/L）体积控制 游离生育酚 硫酸铈滴定法 （四）、含量测定 测定维生素 E 的法定方法是 GC 法，另外还有 HPLC 法、铈量法、比色法和荧光

法。1.采用GC的优点：GC法具有高度选择性，可分离维生素E及其异构体，可选择性地测定维生素E。【本讲课程的小结】今天我们主要讲了维生素CE药物鉴别、含量测定的基本原理与方法。希望同学们重点学习。【本讲课程的作业】1.用碘量法测定的药物有品E维生素C注射液A醋酸地塞米松B丙酸睾酮C.维生素CD.硫酸阿托品2.维生素E《中国药典》规定的含量测定方法为A非水溶液滴定法B旋光法C.HPLC法D.紫外分光法E.GC法3.碘量法测定维生素C的原理和方法是什么？有哪些注意事项？9

9 法。 1．采用 GC 的优点：GC 法具有高度选择性，可分离维生素 E 及其异构体，可选 择性地测定维生素 E。 【本讲课程的小结】今天我们主要讲了维生素 CE 药物鉴别、含量测定的基本 原理与方法。希望同学们重点学习。 【本讲课程的作业】 1．用碘量法测定的药物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 维生素C D. 硫酸阿托品 E. 维生素C注射液 2. 维生素E《中国药典》规定的含量测定方法为 A.非水溶液滴定法 B. 旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E. GC法 3. 碘量法测定维生素 C 的原理和方法是什么？有哪些注意事项？