《营养学》课程教学资源（实验指导）实验三 尿中还原型抗坏血酸测定

实验三尿中还原型抗坏血酸测定【原理】抗坏血酸（维生素C）具有一C-C一基，有还原性。还原型抗坏血酸能还bHOH原染料2，6-二氯酚靛酚，该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样二氯酚靛酚被抗坏血酸还原的反应如下：2，6-二氯酚靛酚抗坏血酸、2. 6-二氯二对酚胺（酸液中呈粉红色）（还原）（无色）【仪器】1. 微量滴定管。2.50ml三角瓶、量筒、移液管等。【试剂】1.2%草酸溶液：称取草酸20g，以去离子水溶解并稀释到1000ml。2.0.02%2.6-二氯酚靛酚溶液：溶解2，6-二氯酚靛酚50mg于含有52mg碳酸氢钠的200ml热水中，冷却后稀释到250ml，过滤后装在棕色瓶内，储存冰箱中，每星期至少标定一次标方法如下：取5ml标准抗坏血酸溶液，加1%草酸5ml，用上液滴定之。至粉红色能存在15秒钟为终点。所用上液的体积相当于0.1mg 抗坏血酸。由此求出每毫升溶液相当于抗坏血酸多少毫克。3.标准抗坏血酸溶液（20ug/ml）：溶解20mg抗坏血酸结晶于1%草酸中，稀释到100ml，再取其中 5ml稀释到 50ml，取出 5ml迅速用染料标定。【操作方法】1．服维生素C片5片（相当于500mg），收集服药后4小时排出的总尿液。2.用量筒量出总尿量，准确吸取尿液2~5ml，放入50ml三角瓶内，加2%草酸5ml。3.立即用标定过的2，6-二氯酚靛酚染料溶液滴定，直至淡粉红色保存15秒钟不褪。记录染料的用量。【计算】染料用量×每ml 染料相当于抗坏血酸的mg数尿中抗坏血酸排出量（mg）X总尿量(ml)滴定时尿液用量(ml)【评价】缺乏不足正常充裕成人负荷尿4小时10mg（口服500mg抗坏血酸）<1mg【思考题】1．如何根据尿负荷的评价标准判断体内抗坏血酸的营养水平？2．其他维生素能否用此方法来评价营养状况？

4 实验三 尿中还原型抗坏血酸测定 【原理】抗坏血酸（维生素 C）具有—C= C—基，有还原性。还原型抗坏血酸能还 OHOH 原染料 2，6-二氯酚靛酚，该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还 原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样二氯酚靛酚被抗坏血酸还原的反应如下： 2，6-二氯酚靛酚 抗坏血酸 2，6-二氯二对酚胺 （酸液中呈粉红色） （还原） （无色） 【仪器】 1．微量滴定管。 2．50ml 三角瓶、量筒、移液管等。 【试剂】 1．2%草酸溶液：称取草酸 20g，以去离子水溶解并稀释到 1000ml。 2．0．02% 2，6-二氯酚靛酚溶液：溶解 2，6-二氯酚靛酚 50mg 于含有 52mg 碳酸氢钠的 200ml 热水中，冷却后稀释到 250ml，过滤后装在棕色瓶内，储存冰箱中，每星期至少标定一次。标定 方法如下：取 5ml 标准抗坏血酸溶液，加 1%草酸 5ml，用上液滴定之。至粉红色能存在 15 秒钟 为终点。所用上液的体积相当于 0.1mg 抗坏血酸。由此求出每毫升溶液相当于抗坏血酸多少毫克。 3．标准抗坏血酸溶液（20μg/ml）：溶解 20mg 抗坏血酸结晶于 1%草酸中，稀释到 100ml，再 取其中 5ml 稀释到 50ml，取出 5ml 迅速用染料标定。 【操作方法】 1．服维生素 C 片 5 片（相当于 500mg），收集服药后 4 小时排出的总尿液。 2．用量筒量出总尿量，准确吸取尿液 2～5ml，放入 50ml 三角瓶内，加 2%草酸 5ml。 3．立即用标定过的 2，6-二氯酚靛酚染料溶液滴定，直至淡粉红色保存 15 秒钟不褪。记录染 料的用量。 【计算】 染料用量×每 ml 染料相当于抗坏血酸的 mg 数 尿中抗坏血酸排出量（mg）＝——————————————————————×总尿量（ml） 滴定时尿液用量（ml） 【评价】 缺乏 不足 正常 充裕 成人负荷尿 4 小时 （口服 500mg 抗坏血酸） ＜1mg ＜3mg 3~10mg ＞10mg 【思考题】 1． 如何根据尿负荷的评价标准判断体内抗坏血酸的营养水平？ 2． 其他维生素能否用此方法来评价营养状况？