《食品微生物学》课程教学课件（讲稿）实验四 食品中金黄色葡萄球菌检验

食品微生物学实验 实验四 食品中金黄色葡萄球菌的检验 (Staphylococcus aureus 主讲：郑海涛

主讲：郑海涛 实验四 食品中金黄色葡萄球菌的检验 (Staphylococcus aureus)

实验目的 1、掌握金黄色葡萄球菌的检验方法。 2、了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依 据及原理 3、本实验根据GB/T4789.37-2008中的第 一法Baird-Parker平板计数进行

一、实验目的 1、掌握金黄色葡萄球菌的检验方法。 2、了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依 据及原理 3、本实验根据GB/T4789.37-2008中的第 一法Baird-Parker平板计数进行

二、实验原理 1、产生色素： 在氧气充足、温度适宜、营养丰富的条 件下葡萄球菌能产生脂溶性色素，色素不溶 于水，在固体培养基上色素集中在菌落上， 按色素的不同可将葡萄球菌分为金黄色葡萄 球菌、柠檬色葡萄球菌和白色葡萄球菌

二、实验原理 1、产生色素： 在氧气充足、温度适宜、营养丰富的条 件下葡萄球菌能产生脂溶性色素，色素不溶 于水，在固体培养基上色素集中在菌落上， 按色素的不同可将葡萄球菌分为金黄色葡萄 球菌、柠檬色葡萄球菌和白色葡萄球菌

二、实验原理 2、产生酶： 血浆凝固酶是一种能使含有枸橼酸钠或 肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝固的酶。大 多数致病性葡萄球菌产生此酶，而非致病性 菌一般不产生。因此，凝固酶是鉴别葡萄球 菌有无致病性的重要指标

二、实验原理 2、产生酶： 血浆凝固酶是一种能使含有枸橼酸钠或 肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝固的酶。大 多数致病性葡萄球菌产生此酶，而非致病性 菌一般不产生。因此，凝固酶是鉴别葡萄球 菌有无致病性的重要指标

三、实验材料及仪器 1、样品： 奶粉、还原奶和饮料等。 2、菌种： 金黄色葡萄球菌(Staphy/ococcus aureus); 藤黄八叠球菌(Sarcina/utea)一 参比菌株

三、实验材料及仪器 1、样品： 奶粉、还原奶和饮料等。 2、菌种： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)； 藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)——参比菌株

三、实验材料及仪器 3、培养基及试剂： 脑心浸出液(BH)肉汤、225ml生理盐水、 9ml无菌生理盐水、营养琼脂培养基，Baird- Parker氏培养基，兔血浆，革兰氏染色液、氢 氧化钠、盐酸等。 4、其它： 显微镜、恒温箱、移液枪、灭菌枪头、均 质器、振荡器、载玻片、酒精灯、L无菌涂布 棒等

三、实验材料及仪器 3、培养基及试剂： 脑心浸出液（BHI）肉汤、225ml生理盐水、 9ml无菌生理盐水、营养琼脂培养基, Baird￾Parker氏培养基, 兔血浆, 革兰氏染色液、氢 氧化钠、盐酸等。 4、其它： 显微镜、恒温箱、移液枪、灭菌枪头、均 质器、振荡器、载玻片、酒精灯、L无菌涂布 棒等

四、检验程序 检样25g十225ml无菌生理盐水，均质 10倍系列稀释 选择3个连续均样稀释液，接种Baird-一Parker平板 36℃土I℃，45h-48h 计数和血浆凝固酶试验 报告 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板法检验程序

四、检验程序 检样25g十225ml无菌生理盐水，均质 10倍系列稀释 选择3个连续均样稀释液，接种 Baird—Parker平板 36℃土l℃，45h-48h 计数和血浆凝固酶试验 报告 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板法检验程序

五、操作步骤 第1次：1、稀释样品 以无菌操作称取检样25g与225mL无菌生理盐 水制成1：10混悬液，依次做10倍系列稀释，每 递增一次换一次吸头。选择2-3个适合稀释度样 品匀样吸取1ml以0.3ml、0.3ml、0.4ml接种量， 分别加入三块Baird-Parker氏平板上，用无菌L 棒涂布平板，注意不要触及平板边缘。 (Baird-Parker平板表面不能有水珠)。倒置 于36℃土1℃恒温箱培养45-48h后观察结果

五、操作步骤 第1次：1、稀释样品 以无菌操作称取检样25g与225mL无菌生理盐 水制成1：10混悬液，依次做10倍系列稀释，每 递增一次换一次吸头。选择2-3个适合稀释度样 品匀样吸取1ml以0.3ml、0.3ml、0.4ml接种量， 分别加入三块Baird-Parker氏平板上，用无菌L 棒涂布平板，注意不要触及平板边缘。 （ Baird-Parker平板表面不能有水珠）。倒置 于36℃土1℃恒温箱培养45-48h后观察结果

操作步骤（续） 第2次 1、观察培养结果，金黄色葡萄球菌在Baird- Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿 润，直径为2-3mm,颜色呈灰色到黑色，边缘 为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透 明带。 用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的 硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落； 但无混浊带及透明圈

操作步骤（续） 第2次 1、观察培养结果，金黄色葡萄球菌在Baird￾Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿 润，直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘 为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透 明带。 用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的 硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落； 但无混浊带及透明圈

操作步骤（续） 2、计数 (1)选择菌落在20-200的平板，计算典型菌落。 a)最低稀释度小于20，计算典型菌落。（式1) b)某一稀释度大于200，且有典型菌落，上一稀释度没 有典型菌落，计算该平板典型菌落。（式2） c)某一稀释度大于200，且有典型菌落，上一稀释度有 典型菌落，且菌落数不在20-200之间，计算该平板典型 菌落。（按式1计算) d)平板菌落数均在20-200之间。（按式2计算） 3、从典型菌落中任选5个菌落（小于5个全选），分别接种 到5mlBH川肉汤和营养琼脂斜面。置36℃土1℃培养18-24h

操作步骤（续） 2、计数 ⑴选择菌落在20-200的平板，计算典型菌落。 a)最低稀释度小于20，计算典型菌落。（式1） b)某一稀释度大于200，且有典型菌落，上一稀释度没 有典型菌落，计算该平板典型菌落。（式2） c)某一稀释度大于200，且有典型菌落，上一稀释度有 典型菌落，且菌落数不在20-200之间，计算该平板典型 菌落。（按式1计算） d)平板菌落数均在20-200之间。（按式2计算） 3、从典型菌落中任选5个菌落（小于5个全选），分别接种 到5mlBHI肉汤和营养琼脂斜面。置36℃土1℃培养18-24h