河北农业大学：《基因工程》课程教学课件（PPT讲稿）基因克隆的载体 vector

基因克隆的载体

基因克隆的载体

Recombinant Eukaryotic vector chromosome transformation (or viral infection) of bacterial host cell Cloning vector (plasmid) cleavage with restriction cleavage with endanuclease,separation of fragmenta endonuclease DNA ligase

载体（vector）是由在细胞中能 够自主复制的ＤＮＡ分子构成的一种 遗传成分，通过实验手段可使其它的 ＤＮＡ片段连接在它的上面，而进行 复制，作为基因工程的载体，必须具 备以下几个性能：

载体（vector）是由在细胞中能 够自主复制的ＤＮＡ分子构成的一种 遗传成分，通过实验手段可使其它的 ＤＮＡ片段连接在它的上面，而进行 复制，作为基因工程的载体，必须具 备以下几个性能：

1、分子较小，可携带比较大的ＤＮＡ片段。 2、能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制。 3、要有尽可能多种限制酶的切割位点，但每一种限制 酶又要最少的切割位点（多克隆位点 multiple cloning sites ，MCS） 。 4、有适合的标记，易于选择。 5、有时还要求载体要能启动外源基因进行转录及表达， 并且尽可能是高效的表达。 6、从安全角度考虑，要求载体不能随便转移，仅限于 在某些实验室内特殊菌种内才可复制等等

1、分子较小，可携带比较大的ＤＮＡ片段。 2、能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制。 3、要有尽可能多种限制酶的切割位点，但每一种限制 酶又要最少的切割位点（多克隆位点 multiple cloning sites ，MCS） 。 4、有适合的标记，易于选择。 5、有时还要求载体要能启动外源基因进行转录及表达， 并且尽可能是高效的表达。 6、从安全角度考虑，要求载体不能随便转移，仅限于 在某些实验室内特殊菌种内才可复制等等

载体 功能 克隆载体: 克隆一个基因或DNA片断 表达载体: 用于一个基因的蛋白表达 整合载体: 把一个基因插入到染色体组中

载体 功能 克隆载体: 克隆一个基因或DNA片断 表达载体: 用于一个基因的蛋白表达 整合载体: 把一个基因插入到染色体组中

载 体 来源： 质粒载体 噬菌体载体 柯斯质粒载体 真核细胞克隆载体

载 体 来源： 质粒载体 噬菌体载体 柯斯质粒载体 真核细胞克隆载体

质粒* 受体细胞 结构 插入片断 举例 E.coli 环状 〈 8* pUC18/19 , T-载体 pGEM- 3z等 λ噬菌体 E.coli 线状 9 - 24kb EMBL系列， Λ gt系列 丝状噬菌体及噬菌粒 E.coli 环状 〈 10 kb M13mp系列 粘粒载体 E.coli 环状 35- 45kb pJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome) E.coli 环状 ≈300 kb Pel oBAC系列 PAC (P1-derived Artificial chromosome) E.coli 环状 100 - 2000 kb PCYPAC1 YAC (Yeast Artificial chromosome ) 酵母细胞 线性染色体 100 - 2000 kb MAC (Mammalian Artificial Chromosome) 哺乳类细胞 线性染色体 〉 1000 kb 病毒载体 动物细胞 环状 SV40 载体，昆虫 杆状病毒载体 穿梭载体 动物细胞 和细菌 环状 pSVK3质粒，PBV, Ti质粒 载体的种类和特征

质粒* 受体细胞 结构 插入片断 举例 E.coli 环状 〈 8* pUC18/19 , T-载体 pGEM- 3z等 λ噬菌体 E.coli 线状 9 - 24kb EMBL系列， Λ gt系列 丝状噬菌体及噬菌粒 E.coli 环状 〈 10 kb M13mp系列 粘粒载体 E.coli 环状 35- 45kb pJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome) E.coli 环状 ≈300 kb Pel oBAC系列 PAC (P1-derived Artificial chromosome) E.coli 环状 100 - 2000 kb PCYPAC1 YAC (Yeast Artificial chromosome ) 酵母细胞 线性染色体 100 - 2000 kb MAC (Mammalian Artificial Chromosome) 哺乳类细胞 线性染色体 〉 1000 kb 病毒载体 动物细胞 环状 SV40 载体，昆虫 杆状病毒载体 穿梭载体 动物细胞 和细菌 环状 pSVK3质粒，PBV, Ti质粒 载体的种类和特征

第一节 质粒（plasmid）载体 质粒是一种独立于染色体外的小分子环状 DNA，一般大小约106~108D，可自身复制和表 达，有的质粒还带有可做为选择性标记的抗药 性基因，所以质粒经过适当改选后便可成为良 好的载体。 作为载体的质粒大多是由天然质粒经人工适 当改造而成的，目前已有多种经改造的良好的 质粒载体

第一节 质粒（plasmid）载体 质粒是一种独立于染色体外的小分子环状 DNA，一般大小约106~108D，可自身复制和表 达，有的质粒还带有可做为选择性标记的抗药 性基因，所以质粒经过适当改选后便可成为良 好的载体。 作为载体的质粒大多是由天然质粒经人工适 当改造而成的，目前已有多种经改造的良好的 质粒载体

质粒（plasmid） 是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA 分子。大小约为 数千碱基对。常 有1 ~ 3个抗药 性基因，以利于 筛选

质粒（plasmid） 是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA 分子。大小约为 数千碱基对。常 有1 ~ 3个抗药 性基因，以利于 筛选

质粒载体 1. 克隆的质粒载体 允许外源的DNA插入，储存。主要 是DNA水平上的操作。 2.基因表达的质粒载体 允许外源DNA的插入、储存和表达

质粒载体 1. 克隆的质粒载体 允许外源的DNA插入，储存。主要 是DNA水平上的操作。 2.基因表达的质粒载体 允许外源DNA的插入、储存和表达