厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验二 叶绿素含量的测定

实验二. 叶绿素含量的测定

实验二. 叶绿素含量的测定

一 .实验原理 叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、 645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密 度D间的关系式： D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位：g/mL） CA= 12.72D663 – 2.59D645 CB= 22.88D645 – 4.68 D663 CT = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位：mg/L）

一 .实验原理 叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、 645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密 度D间的关系式： D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位：g/mL） CA= 12.72D663 – 2.59D645 CB= 22.88D645 – 4.68 D663 CT = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位：mg/L）

二. 试剂与材料 2.1 试剂： 丙酮、石英砂、碳酸钙 2.2材料： 水稻、玉米、花生、桑树等植物的新鲜叶片。 2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、 漏斗、大试管

二. 试剂与材料 2.1 试剂： 丙酮、石英砂、碳酸钙 2.2材料： 水稻、玉米、花生、桑树等植物的新鲜叶片。 2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、 漏斗、大试管

叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至10mL ↓ 适当稀释后测A645、A663 三. 实验步骤

叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至10mL ↓ 适当稀释后测A645、A663 三. 实验步骤

四. 结果计算 4.1 结果计算 C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数 Chl = (mg/g叶) 材料鲜重（g） 4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异

四. 结果计算 4.1 结果计算 C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数 Chl = (mg/g叶) 材料鲜重（g） 4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异

五. 注意事项 ⚫ 注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 ⚫ 叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂， 如果浓度太高可进行适当稀释 ⚫ 注意分光光度计的规范使用

五. 注意事项 ⚫ 注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 ⚫ 叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂， 如果浓度太高可进行适当稀释 ⚫ 注意分光光度计的规范使用

六. 思考题 ⚫ 为什么植物在不同生长环境下其Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？

六. 思考题 ⚫ 为什么植物在不同生长环境下其Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？