厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验四-4、pH对淀粉酶活性的影响

实验四-4 pH对淀粉酶活性的影 响

实验四-4 pH对淀粉酶活性的影 响

一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各 种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最 高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH 时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于 一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同 而有差异

一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各 种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最 高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH 时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于 一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同 而有差异

三、试剂和器材 1. 试剂 0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化 钾－碘溶液 2. 器材 恒温水浴锅 四、 操作步骤 1. 取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠 溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的 三种缓冲溶液

三、试剂和器材 1. 试剂 0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化 钾－碘溶液 2. 器材 恒温水浴锅 四、 操作步骤 1. 取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠 溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的 三种缓冲溶液

锥形瓶号 0.2mol/L磷酸氢 二钠（mL） 0.1mol/L柠 檬酸 缓冲液pH 1 2 3 5.15 7.72 9.72 4.85 2.28 0.28 5.0 6.8 8.0 2. 另取3只干净试管，按下表操作

锥形瓶号 0.2mol/L磷酸氢 二钠（mL） 0.1mol/L柠 檬酸 缓冲液pH 1 2 3 5.15 7.72 9.72 4.85 2.28 0.28 5.0 6.8 8.0 2. 另取3只干净试管，按下表操作

试管编号 试剂处理 1 2 3 pH5.0缓冲溶液/mL 3 - - pHh6.8缓冲溶液/mL - 3 - pHh8.0缓冲溶液/mL - - 3 0.5%淀粉溶液/mL 2 2 2 每隔1min逐管加入唾液稀 释液/mL 2 2 2 充分摇匀，置37 ℃水浴保温2 min，到达保温时间后，每隔1min依次取出 立即加碘化钾－碘溶液/滴 2 2 2 记录观察结果

试管编号 试剂处理 1 2 3 pH5.0缓冲溶液/mL 3 - - pHh6.8缓冲溶液/mL - 3 - pHh8.0缓冲溶液/mL - - 3 0.5%淀粉溶液/mL 2 2 2 每隔1min逐管加入唾液稀 释液/mL 2 2 2 充分摇匀，置37 ℃水浴保温2 min，到达保温时间后，每隔1min依次取出 立即加碘化钾－碘溶液/滴 2 2 2 记录观察结果

五、注意事项 1. 本实验中的保温时间是2min，但实际是 随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的，所以在 实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键； 2. 加入酶液后务必充分摇匀，保证酶与全 部淀粉溶液接触，反应才能得到理想的颜色梯 度变化结果

五、注意事项 1. 本实验中的保温时间是2min，但实际是 随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的，所以在 实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键； 2. 加入酶液后务必充分摇匀，保证酶与全 部淀粉溶液接触，反应才能得到理想的颜色梯 度变化结果

六、思考题 1. pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么？ 2. pH值改变导致的活性丧失， pH值恢复后活性 也能恢复吗？

六、思考题 1. pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么？ 2. pH值改变导致的活性丧失， pH值恢复后活性 也能恢复吗？