厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十、酪蛋白的制备

实验十 酪蛋白的制备

实验十 酪蛋白的制备

一、目的要求 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和 方法。 二、原理 牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成 份。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀， 再通过离心而获得，糖类小分子由于处 于清液中而分离，沉淀物中所含的脂肪 通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯 白色、晶状酪蛋白

一、目的要求 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和 方法。 二、原理 牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成 份。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀， 再通过离心而获得，糖类小分子由于处 于清液中而分离，沉淀物中所含的脂肪 通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯 白色、晶状酪蛋白

三、试剂与器材 试剂：0.2 mol/L HAc-Na buffer、 95%乙醇、乙醚 器材：离心机、水浴锅、pH计

三、试剂与器材 试剂：0.2 mol/L HAc-Na buffer、 95%乙醇、乙醚 器材：离心机、水浴锅、pH计

四、操作方法 10mL牛奶 预热 调pH至4.7 室温冷却 离心得 沉淀 于离心管内悬浮 离心 得沉淀 于离心管内去脂肪 漏斗过滤 滤干 洗涤 洗涤（脂肪完毕） 带 滤纸烘干 称重 计算。 40°C 40°C预热的醋酸buffer 10mL 边加边搅拌 5000r/min 5min 4mL H2O 5000r/min 5min 20mL乙醇 5min 20mL乙醇 微搅动 20mL乙醇乙醚混合液（1:1） 20mL乙醚 60°C,4h

四、操作方法 10mL牛奶 预热 调pH至4.7 室温冷却 离心得 沉淀 于离心管内悬浮 离心 得沉淀 于离心管内去脂肪 漏斗过滤 滤干 洗涤 洗涤（脂肪完毕） 带 滤纸烘干 称重 计算。 40°C 40°C预热的醋酸buffer 10mL 边加边搅拌 5000r/min 5min 4mL H2O 5000r/min 5min 20mL乙醇 5min 20mL乙醇 微搅动 20mL乙醇乙醚混合液（1:1） 20mL乙醚 60°C,4h

五、计算 实际获得百分率= ╳ 100% 六、注意事项 1、牛奶与缓冲液要预热 2、缓冲液要缓加缓搅 3、在滤纸上样品的脱脂过程要搅动，不得 破滤纸 4、实验环境要保持空气流通，门窗要开 酪蛋白质量（g） 10mL 牛奶

五、计算 实际获得百分率= ╳ 100% 六、注意事项 1、牛奶与缓冲液要预热 2、缓冲液要缓加缓搅 3、在滤纸上样品的脱脂过程要搅动，不得 破滤纸 4、实验环境要保持空气流通，门窗要开 酪蛋白质量（g） 10mL 牛奶

七、思考题 1.在酪蛋白制备时为什么要用醋酸缓冲液调pH到4.8？ 2.乙醚、乙醇作用是什么？

七、思考题 1.在酪蛋白制备时为什么要用醋酸缓冲液调pH到4.8？ 2.乙醚、乙醇作用是什么？