厦门大学：《现代生物实验学》课程教学资源（教案讲义）2.11_免疫细胞化学染色观察肿瘤细胞蛋白的表达与分布

实验十一 激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用 仪器设备：荧光显微镜、振荡器、恒温箱、 器具：盖玻片、载玻片、培养皿、滤纸、镊子、吸水纸、粗滤纸、塑料器皿、染色架、带盖 放盘、培养皿、烧杯、试剂瓶、容量瓶、加样枪（200 微升）、塑料离心管、 离心管架、枪头（200 微升）200 个 、滴瓶、量筒（1000ml、100ml）、染色缸 材料：肿瘤细胞 试剂及其配置： 玻片处理：载玻片、盖玻片先用酸液浸泡数小时，自来水冲洗干净后，再用 10%过氧化氢 浸 10 分钟，自来水冲干净，浸入蒸馏水片刻，干燥备用。另准备干净塑料器皿（不能用玻 璃器皿），用蒸馏水 1：10 稀释多聚赖氨酸（处理掉吸附在玻片上带荧光的物质），干净载玻 片放入液体内室温浸泡 5 分钟，捞出后于无尘处干燥或烘烤(60℃干燥 1 小时，或室温过夜)。 上述稀释液可反复用于浸泡。 （多聚赖氨酸：免疫组化及常规组织染色的粘片剂。其分子结构中所具有的多个阳离子集团 与组织上阴离子紧密结合，在各种微波操作过程中能够有效地防脱片。稀释后的溶液在三个 月内保持稳定，用后过滤。） (1) 0.1M PBS 配制：配 3000ml A：Na2HPO4·12H2O 71.64g_1000ml B：NaH2PO4·2H2O 31.21g_1000ml 或 NaH2PO4·H2O 27.6g_1000ml 0.1M PBS（pH7.2）配制: A36.0ml+B 14.0ml+50ml DW=100ml (2) 0.01M PBS 配制: 0.1M PBS 2000ml+18000ml DW=20000ml 0.01M PBS (3) 取 0.5ml 羊血清+ 4.5ml0.01M PBS= 5ml 10%的正常羊血清封闭液。（临用前配） (4) 二级荧光抗体（0.1mg/ml） 羊抗鼠 IgG-FITC （临用前配） (5) DAB 显色液（临用前配）(使用时要小心) (6) 甘油/PBS 封片剂：0.01M PBS：甘油=1：9 （V/V） 0.5ml 4.5ml （7）丙酮

实验十一 激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用 仪器设备：荧光显微镜、振荡器、恒温箱、 器具：盖玻片、载玻片、培养皿、滤纸、镊子、吸水纸、粗滤纸、塑料器皿、染色架、带盖 放盘、培养皿、烧杯、试剂瓶、容量瓶、加样枪（200 微升）、塑料离心管、 离心管架、枪头（200 微升）200 个 、滴瓶、量筒（1000ml、100ml）、染色缸 材料：肿瘤细胞 试剂及其配置： 玻片处理：载玻片、盖玻片先用酸液浸泡数小时，自来水冲洗干净后，再用 10%过氧化氢 浸 10 分钟，自来水冲干净，浸入蒸馏水片刻，干燥备用。另准备干净塑料器皿（不能用玻 璃器皿），用蒸馏水 1：10 稀释多聚赖氨酸（处理掉吸附在玻片上带荧光的物质），干净载玻 片放入液体内室温浸泡 5 分钟，捞出后于无尘处干燥或烘烤(60℃干燥 1 小时，或室温过夜)。 上述稀释液可反复用于浸泡。 （多聚赖氨酸：免疫组化及常规组织染色的粘片剂。其分子结构中所具有的多个阳离子集团 与组织上阴离子紧密结合，在各种微波操作过程中能够有效地防脱片。稀释后的溶液在三个 月内保持稳定，用后过滤。） (1) 0.1M PBS 配制：配 3000ml A：Na2HPO4·12H2O 71.64g_1000ml B：NaH2PO4·2H2O 31.21g_1000ml 或 NaH2PO4·H2O 27.6g_1000ml 0.1M PBS（pH7.2）配制: A36.0ml+B 14.0ml+50ml DW=100ml (2) 0.01M PBS 配制: 0.1M PBS 2000ml+18000ml DW=20000ml 0.01M PBS (3) 取 0.5ml 羊血清+ 4.5ml0.01M PBS= 5ml 10%的正常羊血清封闭液。（临用前配） (4) 二级荧光抗体（0.1mg/ml） 羊抗鼠 IgG-FITC （临用前配） (5) DAB 显色液（临用前配）(使用时要小心) (6) 甘油/PBS 封片剂：0.01M PBS：甘油=1：9 （V/V） 0.5ml 4.5ml （7）丙酮