厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十五、DNA的定量测定

实验十五 DNA的定量测定

实验十五 DNA的定量测定

一、实验目的 学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。 二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法 和分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。本实验采 用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在酸性溶液 中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在 595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其峰 值与DNA含量成正比。 DNA + NH 100℃ 冰醋酸，少量硫酸 蓝色物

一、实验目的 学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。 二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法 和分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。本实验采 用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在酸性溶液 中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在 595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其峰 值与DNA含量成正比。 DNA + NH 100℃ 冰醋酸，少量硫酸 蓝色物

三、试剂和器材 1. 试剂 200mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平 四、操作步骤 1. 标准曲线的制作 取12只试管分成6组，按下表操作。取2管 的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐 标，绘制标准曲线

三、试剂和器材 1. 试剂 200mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平 四、操作步骤 1. 标准曲线的制作 取12只试管分成6组，按下表操作。取2管 的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐 标，绘制标准曲线

试管 0 1 2 3 4 5 标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0 二苯胺试剂 /mL 4 4 4 4 4 4 60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色 光密度值

试管 0 1 2 3 4 5 标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0 二苯胺试剂 /mL 4 4 4 4 4 4 60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色 光密度值

2. 样品的测定 取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇 匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度 值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应 的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 DNA%＝ 五、注意事项 其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对 实验有干扰，测定前应尽可能除去。 待测样品中测得的DNA的mg数 待测样品液中样品的mg数 X 100

2. 样品的测定 取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇 匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度 值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应 的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 DNA%＝ 五、注意事项 其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对 实验有干扰，测定前应尽可能除去。 待测样品中测得的DNA的mg数 待测样品液中样品的mg数 X 100

六、思考题 1、 DNA含量测定的方法有哪些？各有何优 缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原理

六、思考题 1、 DNA含量测定的方法有哪些？各有何优 缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原理