厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验六、活细胞观察及相差显微镜的使用

实验六 活细胞观察及相差显微镜的使用 一. 实验原理 这是因为人的眼睛只在光的波长(颜色)和振幅(亮度)变化时能观察到 被检的物体，而活细胞或末经染色标本多为无色透明，当光波被通过时， 其波长和振幅并没发生什么变化，所以无法辨认。为了观察活细胞的显 微结构，就需要使用相差显微镜。 相差显微镜与普通显微镜主要不同之处在于用环状光栏代替可变光栏， 用带相板(phase plate)的物镜(通常用“ph”标志)代替普通物镜，并带 有一个合轴调中望远镜(telescopd及滤色片。这些特殊装置能使活细胞 或末经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异，产生相位差， 然后利用光的衍射和干涉的原理，把相差变成振幅(明暗)之差，使人的肉 眼能够辨认出来。 二.试剂与器械 器材 :相差显微镜、剪刀、镊子、解剖针．载玻片

实验六 活细胞观察及相差显微镜的使用 一. 实验原理 这是因为人的眼睛只在光的波长(颜色)和振幅(亮度)变化时能观察到 被检的物体，而活细胞或末经染色标本多为无色透明，当光波被通过时， 其波长和振幅并没发生什么变化，所以无法辨认。为了观察活细胞的显 微结构，就需要使用相差显微镜。 相差显微镜与普通显微镜主要不同之处在于用环状光栏代替可变光栏， 用带相板(phase plate)的物镜(通常用“ph”标志)代替普通物镜，并带 有一个合轴调中望远镜(telescopd及滤色片。这些特殊装置能使活细胞 或末经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异，产生相位差， 然后利用光的衍射和干涉的原理，把相差变成振幅(明暗)之差，使人的肉 眼能够辨认出来。 二.试剂与器械 器材 :相差显微镜、剪刀、镊子、解剖针．载玻片

相 差 附 件

相 差 附 件

三、实验步骤 (一)相差显微镜的使用 1.相差显微镜的装置 取下普通显微镜的聚光器，换上带有环状光相的转盘聚光器，并将标示 孔指"0"(即明视野);取下普通物镜，装上相差物镜。 2.调焦和调光 用普通低倍物镜在明视野中观察，当发现目标后，把观察的目的物移到 视野的中央。观察透明物体时要缩小光栏，当用相差物镜在明视野对好焦 点后，换上相应的环状光栏，例如l0X相差物镜用l0X标示孔的光栏，并充 分开大孔径光栏。 3. 中心调节（合轴调节） 拨出目镜，插入中心望远镜，用左手固定其外筒，一边眼看望远镜，一 边用右手转动望远镜内筒使其升降，对准焦点后就能看到环状光栏的亮环 和相板的黑环。此时可将望远镜固定，微微转动聚光器两侧的调节钮，使 两者完全重合。如果亮环和黑环大小一不致，可升降聚光器便之一致，如 果升降聚光器仍不能矫正亮环和黑环一致的话，那就是载、盖玻片过厚的 缘故。换用不同物镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴

三、实验步骤 (一)相差显微镜的使用 1.相差显微镜的装置 取下普通显微镜的聚光器，换上带有环状光相的转盘聚光器，并将标示 孔指"0"(即明视野);取下普通物镜，装上相差物镜。 2.调焦和调光 用普通低倍物镜在明视野中观察，当发现目标后，把观察的目的物移到 视野的中央。观察透明物体时要缩小光栏，当用相差物镜在明视野对好焦 点后，换上相应的环状光栏，例如l0X相差物镜用l0X标示孔的光栏，并充 分开大孔径光栏。 3. 中心调节（合轴调节） 拨出目镜，插入中心望远镜，用左手固定其外筒，一边眼看望远镜，一 边用右手转动望远镜内筒使其升降，对准焦点后就能看到环状光栏的亮环 和相板的黑环。此时可将望远镜固定，微微转动聚光器两侧的调节钮，使 两者完全重合。如果亮环和黑环大小一不致，可升降聚光器便之一致，如 果升降聚光器仍不能矫正亮环和黑环一致的话，那就是载、盖玻片过厚的 缘故。换用不同物镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴

相 差 调 节

相 差 调 节

(二)动物活细胞的相差显微镜观察 观察蛙肝细胞装片 用镊子和解剖针，把蛙的肝组织小块放在载玻片上，滴上生理盐 水，分离出游离肝细胞。 四. 注意事项 换用不同物镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴。 五. 实验结果 在相差显微镜下，可见折射率较高的大的球形细胞核，内含折射 率更高的小颗粒核仁。在细胞核周围还可见到许多暗白的小颗粒即 为线粒体。细胞质中还有许多大小不等明亮的细胞质颗粒。 六. 思考题 1. 简述相差显微镜与普通光学显微镜的差别。 2. 描述蛙肝细胞的形态特点

(二)动物活细胞的相差显微镜观察 观察蛙肝细胞装片 用镊子和解剖针，把蛙的肝组织小块放在载玻片上，滴上生理盐 水，分离出游离肝细胞。 四. 注意事项 换用不同物镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴。 五. 实验结果 在相差显微镜下，可见折射率较高的大的球形细胞核，内含折射 率更高的小颗粒核仁。在细胞核周围还可见到许多暗白的小颗粒即 为线粒体。细胞质中还有许多大小不等明亮的细胞质颗粒。 六. 思考题 1. 简述相差显微镜与普通光学显微镜的差别。 2. 描述蛙肝细胞的形态特点