厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验四、动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察

实验四 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察 一. 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种 染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生 命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官 和生理状态的不同而发生变化。詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超 活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保 持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些 染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 二.试剂与器械 1.器材 :显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、 解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸 管、牙 签、吸水纸。 2.试剂：Ringer溶液 、10%中性红溶液 、1%詹纳斯绿B溶液

实验四 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察 一. 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种 染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生 命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官 和生理状态的不同而发生变化。詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超 活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保 持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些 染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 二.试剂与器械 1.器材 :显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、 解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸 管、牙 签、吸水纸。 2.试剂：Ringer溶液 、10%中性红溶液 、1%詹纳斯绿B溶液

三．实验步骤 （一）线粒体的超活染色 1. 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000 詹纳斯绿B染液。 。 2. 实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，染色10－l5min(注意 不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水 纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 3. 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观 察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝 绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 （二）油镜的观察操作 1. 把镜筒向上提升约1·5cm(有的是载物台向下降1·5cm)，再把油 镜转到工作位置

三．实验步骤 （一）线粒体的超活染色 1. 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000 詹纳斯绿B染液。 。 2. 实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，染色10－l5min(注意 不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水 纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 3. 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观 察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝 绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 （二）油镜的观察操作 1. 把镜筒向上提升约1·5cm(有的是载物台向下降1·5cm)，再把油 镜转到工作位置

2. 在聚光器和盖玻片上所要观察的位置各滴一小滴香柏油或石蜡 油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油 镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻 片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺 旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。 3. 观察完毕后，提升物镜约lcm，把油镜转离光轴，及时做清洁 工作。油镜先用干的擦镜纸擦1一2次，把部分油去掉，再用清 洁剂(70%乙醚+30%无水乙醇)或二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次， 最 后用于擦镜纸擦1次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油 也用同样方法处理

2. 在聚光器和盖玻片上所要观察的位置各滴一小滴香柏油或石蜡 油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油 镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻 片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺 旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。 3. 观察完毕后，提升物镜约lcm，把油镜转离光轴，及时做清洁 工作。油镜先用干的擦镜纸擦1一2次，把部分油去掉，再用清 洁剂(70%乙醚+30%无水乙醇)或二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次， 最 后用于擦镜纸擦1次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油 也用同样方法处理

四. 注意事项 应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能 成功。 五. 实验结果 可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或 蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 六. 思考题 1.简述使用油镜前后的注意事项。 2. 描绘描述线粒体的形态结构

四. 注意事项 应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能 成功。 五. 实验结果 可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或 蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 六. 思考题 1.简述使用油镜前后的注意事项。 2. 描绘描述线粒体的形态结构