厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验二、叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量

实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量 一. 实验原理 1.组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心 力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大 小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均 一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即 可获得各种亚细胞组分。 2. 应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺， 两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。 二.试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个，纱布若干， 无荧光载片和盖片各4片。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)

实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量 一. 实验原理 1.组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心 力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大 小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均 一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即 可获得各种亚细胞组分。 2. 应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺， 两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。 二.试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个，纱布若干， 无荧光载片和盖片各4片。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)

三. 实验步骤 （一）叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min，弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下观察

三. 实验步骤 （一）叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min，弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下观察

目镜测微尺 基础知识

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奥林巴斯显微镜常用测微尺

奥林巴斯显微镜常用测微尺

(二）测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上， 再旋上目镜的上透镜。 2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位 于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动 目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的"0"点一直线重合，然后由左向右 找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。 4·记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目 镜测微尺每格的长度等于多少µm 目镜测微尺每格的长度/ µm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 (三) 鸭血细胞的观察测量 将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上，滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲 涂片上，静置染色1分钟，滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，用牙签轻轻 搅拌混匀，再静置染色5－10分钟，最后用清水缓缓冲洗1分钟，倾斜放 置，凉干后进行观察测量

(二）测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上， 再旋上目镜的上透镜。 2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位 于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动 目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的"0"点一直线重合，然后由左向右 找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。 4·记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目 镜测微尺每格的长度等于多少µm 目镜测微尺每格的长度/ µm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 (三) 鸭血细胞的观察测量 将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上，滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲 涂片上，静置染色1分钟，滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，用牙签轻轻 搅拌混匀，再静置染色5－10分钟，最后用清水缓缓冲洗1分钟，倾斜放 置，凉干后进行观察测量

四. 注意事项 不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。 五. 实验结果 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可 看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。 2. 用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴，分别测 量5-10个叶绿体，求其平均值。 六. 思考题 1. 分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。 2. 鸭红细胞直径为多少微米

四. 注意事项 不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。 五. 实验结果 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可 看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。 2. 用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴，分别测 量5-10个叶绿体，求其平均值。 六. 思考题 1. 分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。 2. 鸭红细胞直径为多少微米