厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十二、氨基酸的纸层析

实验十二 氨基酸的纸层析

实验十二 氨基酸的纸层析

一、实验目的 掌握氨基酸纸上层析的方法和原理，学会分析未知样品 的氨基酸成分。 二、原理 滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上 的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流 动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提， 使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动 速度用Rf值表示： Rf ＝ 物质结构、溶剂系统的物质组成等因素都会影响Rf值。 原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离

一、实验目的 掌握氨基酸纸上层析的方法和原理，学会分析未知样品 的氨基酸成分。 二、原理 滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上 的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流 动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提， 使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动 速度用Rf值表示： Rf ＝ 物质结构、溶剂系统的物质组成等因素都会影响Rf值。 原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离

三、试剂和器材 1. 试剂 0.5%茚三酮溶液、标准氨基酸溶液 溶剂系统： 正丁醇－88％甲酸－水(15：3：2， V/V) 2. 器材 层析缸、毛细管、电吹风 四、操作步骤 如下页所示

三、试剂和器材 1. 试剂 0.5%茚三酮溶液、标准氨基酸溶液 溶剂系统： 正丁醇－88％甲酸－水(15：3：2， V/V) 2. 器材 层析缸、毛细管、电吹风 四、操作步骤 如下页所示

操作流程： 点样 层析 显色 滤纸一边1.5厘米处划线，在线上等距离划6个点 毛细管吸样品（约2cm高）点样，直径小于0.5cm， 电吹风吹干，重复一次。干燥后将滤纸卷成圆形， 缝合滤纸，注意两边缘不能接触。 酸层析液放入培养皿中，将滤纸垂直放置在培 养皿中，盖紧缸盖。 层析纸2/3-3/4处取出滤纸， 电吹风吹干，划前沿线。 喷雾器均匀喷上茚三酮溶液，电吹风热风吹 干至看到AA彩色斑点。用铅笔将图谱上的 斑点圈出，测Rf相关值

操作流程： 点样 层析 显色 滤纸一边1.5厘米处划线，在线上等距离划6个点 毛细管吸样品（约2cm高）点样，直径小于0.5cm， 电吹风吹干，重复一次。干燥后将滤纸卷成圆形， 缝合滤纸，注意两边缘不能接触。 酸层析液放入培养皿中，将滤纸垂直放置在培 养皿中，盖紧缸盖。 层析纸2/3-3/4处取出滤纸， 电吹风吹干，划前沿线。 喷雾器均匀喷上茚三酮溶液，电吹风热风吹 干至看到AA彩色斑点。用铅笔将图谱上的 斑点圈出，测Rf相关值

五、注意事项 1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操 作时带手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷 了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。 六、思考题 1、如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的 测定？ 2、纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析 各有什么特点？

五、注意事项 1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操 作时带手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷 了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。 六、思考题 1、如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的 测定？ 2、纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析 各有什么特点？