厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验七、荧光显微镜及激光扫描共聚焦显微镜使用

实验七-1 细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用 （示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）

实验七-1 细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用 （示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）

实验目的与教学要求 1. 掌握荧光显微镜的成像基本原理及 其使用； 2. 掌握暗视野显微镜的成像基本原理 及其使用

实验目的与教学要求 1. 掌握荧光显微镜的成像基本原理及 其使用； 2. 掌握暗视野显微镜的成像基本原理 及其使用

荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其 基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激 发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品 结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 一、荧光显微镜的成像原理

荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其 基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激 发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品 结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 一、荧光显微镜的成像原理

什么是荧光 ? ◼物质中的电子吸收光的能量由低能状态 转变为高能状态，再回到低能状态时释 放出的光。 ◼即：物质吸收短波光，发射出的长波光

什么是荧光 ? ◼物质中的电子吸收光的能量由低能状态 转变为高能状态，再回到低能状态时释 放出的光。 ◼即：物质吸收短波光，发射出的长波光

◼保持固有的荧光特性 ◼荧光波长＞激发波长 ◼荧光强度极小于激发光的强度 ◼有不同程度的衰减 ◼荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 荧光的性质

◼保持固有的荧光特性 ◼荧光波长＞激发波长 ◼荧光强度极小于激发光的强度 ◼有不同程度的衰减 ◼荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 荧光的性质

优点： ◼ 检出能力高 ◼ 对细胞的刺激小 ◼ 能进行多重染色 用途： ◼ 物体构造的观察 ◼ 荧光的有无、色调比较进行物质判别 ◼ 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 荧光显微镜的优点和用途

优点： ◼ 检出能力高 ◼ 对细胞的刺激小 ◼ 能进行多重染色 用途： ◼ 物体构造的观察 ◼ 荧光的有无、色调比较进行物质判别 ◼ 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 荧光显微镜的优点和用途

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荧光素 激发波长 发射波长 DAPI 372 456 AMCA 350 450 Hoechst 33258 365 465 FITC 490 520 Acridine Orange 490 590 Acridine Yellow 470 550 CY3 552 565 TRITC 541 572 Propidium Iodide 530 615 荧光素的特性

荧光素 激发波长 发射波长 DAPI 372 456 AMCA 350 450 Hoechst 33258 365 465 FITC 490 520 Acridine Orange 490 590 Acridine Yellow 470 550 CY3 552 565 TRITC 541 572 Propidium Iodide 530 615 荧光素的特性

1. 对细胞结构或组分的定性、定位、半 定量研究。 2. 作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。 荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用

1. 对细胞结构或组分的定性、定位、半 定量研究。 2. 作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。 荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用