厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十一、Feulgen及PAS反应.ppt_大学文库

实验十一核酸的显示方法——Feulgen反应糖类的显示方法——PAS反应

实验目的与要求 1. 掌握Feulgen反应的基本原理 2. 掌握PAS反应的基本原理 3. 熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能

一、实验的基本原理细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量

Feulgen反应的基本原理：稀HCl水解DNA，破坏嘌呤和脱氧核糖间的配糖键，并在脱氧核糖C1端形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有 DNA的部位，就会呈现除紫红色阳性反应

PAS反应的基本原理：利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应

二、试剂与器材青蛙、鸭子剪刀、载玻片、盖玻片、吸管、甲醇、1 mol/L 盐酸、Schiff试剂、亚硫酸盐溶液、1%亮绿水溶液、 1%过碘酸、苏木精、甘油/PBS封片剂普通光学显微镜

核酸的显示——Feulgen反应 1. 取鸭血，血涂片，室温凉干，甲醇室温固定5 min，凉干; 2. 蒸馏水过一下； 3. 1 mol/L 盐酸(600C )水解8-10 min; 4. 1 mol/L 盐酸（室温）1 min; 5. 蒸馏水稍洗； 6. 置Schiff试剂中室温染色1小时左右； 7. 亚硫酸盐溶液洗3次，总时间为6 min; 8. 自来水流水冲洗5 min，蒸馏水过一下； 9. 用1%亮绿水溶液复染5-10秒； 10. 自来水流水冲洗2 min; 11. 蒸馏水稍洗； 12. 甘油/PBS封片剂封片；显微镜观察。三、实验步骤

糖类的显示——PAS反应 1. 取鸭血，血涂片，室温凉干，甲醇室温固定5 min，凉干; 2. 蒸馏水过一下； 3. 1%过碘酸水溶液浸泡2-5min; 4. 蒸馏水洗； 5. Schiff试剂浸泡15min; 6. 亚硫酸盐溶液浸泡3次，共6min; 7. 自来水冲洗5min; 8. 蒸馏水浸泡1min; 9. 苏木精复染细胞核10-15min; 10. 自来水流水冲洗2min; 11. 蒸馏水稍洗； 12. 甘油/PBS封片剂封片； 13. 显微镜观察

1. 使用Schiff试剂时要注意不小心染色; 2. 盐酸水解时要注意温度及处理时间. 四、注意事项

五、作业与思考题简述Feulgen反应和PAS反应的原理，并描述显微观察到的实验现象。思考题: Schiff试剂的主要作用是什么?