厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十二石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水

实验十二 石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水 一、实验原理 • 取 材： 用于制片的动植物材料应选择新鲜的，用陈 腐材料制片，往往不能反映材料的真正情况。 • 固 定： 固定是借助化学药品的作用,使细胞组织的形 态保存下来,不使其改变形态和变质

实验十二 石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水 一、实验原理 • 取 材： 用于制片的动植物材料应选择新鲜的，用陈 腐材料制片，往往不能反映材料的真正情况。 • 固 定： 固定是借助化学药品的作用,使细胞组织的形 态保存下来,不使其改变形态和变质

• 洗 涤:是洗去渗入细胞内部的固定液。因材料中的固 定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶，影响观 察；有的会继续作用，使材料变坏等。 • 脱 水：材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水 剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存。 因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的， 只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入

• 洗 涤:是洗去渗入细胞内部的固定液。因材料中的固 定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶，影响观 察；有的会继续作用，使材料变坏等。 • 脱 水：材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水 剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存。 因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的， 只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入

二、试剂与器材 1. 试 剂：10%中性福尔马林固定液、各级乙醇（50%、70%、 85%、95%、100%） 2.器 材：解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、 单面刀片、培养皿、吸管、指形管、 橡皮圈、软木塞、胶布、塑料脸盆

二、试剂与器材 1. 试 剂：10%中性福尔马林固定液、各级乙醇（50%、70%、 85%、95%、100%） 2.器 材：解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、 单面刀片、培养皿、吸管、指形管、 橡皮圈、软木塞、胶布、塑料脸盆

三、实验程序 1．取材：用锋利的刀片切取材料。 2．固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液中 固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。 3．洗涤：材料自固定液中取出，放入指形管，加入 半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水 冲洗。流水冲洗时间一般需要12-24小时。 4．脱水：材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。 一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留 约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中

三、实验程序 1．取材：用锋利的刀片切取材料。 2．固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液中 固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。 3．洗涤：材料自固定液中取出，放入指形管，加入 半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水 冲洗。流水冲洗时间一般需要12-24小时。 4．脱水：材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。 一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留 约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中

四、注意事项 取材的注意事项： • 材料应新鲜； • 动作要迅速； • 取病理材料时，应加对照。 固定的注意事项 • 固定液以新配为好 ； • 固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定； • 材料固定完毕，保存于加盖的容器，贴上标签

四、注意事项 取材的注意事项： • 材料应新鲜； • 动作要迅速； • 取病理材料时，应加对照。 固定的注意事项 • 固定液以新配为好 ； • 固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定； • 材料固定完毕，保存于加盖的容器，贴上标签

洗涤的注意事项 • 洗涤的时间、方法视固定液的种类等而定； • 水洗时，水流不宜太急。 脱水的注意事项 • 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分； • 在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料，以免损坏； • 在低浓度酒精中，每级停留时间不宜太长，防止材料解体； • 在高浓度酒精中，每级停留的时间也不宜太长，防止材料变脆； • 脱水必须彻底，否则不易透明

洗涤的注意事项 • 洗涤的时间、方法视固定液的种类等而定； • 水洗时，水流不宜太急。 脱水的注意事项 • 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分； • 在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料，以免损坏； • 在低浓度酒精中，每级停留时间不宜太长，防止材料解体； • 在高浓度酒精中，每级停留的时间也不宜太长，防止材料变脆； • 脱水必须彻底，否则不易透明

五、思考题 1. 为什么切取病理材料时应加对照？ 2. 为什么固定液要以新配为好？

五、思考题 1. 为什么切取病理材料时应加对照？ 2. 为什么固定液要以新配为好？