厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）开放实验：植物RAPD分析

分子生物学部分开发实验 植物遗传亲缘关系研究

分子生物学部分开发实验 植物遗传亲缘关系研究

实验目的 运用PCR-RAPD 分子标记技术，对不同种 植物的基因组DNA进行PCR扩增，获得指 纹图谱。同时运用统计分析方法，计算 不同物种的遗传距离，得出物种间的亲 缘关系

实验目的 运用PCR-RAPD 分子标记技术，对不同种 植物的基因组DNA进行PCR扩增，获得指 纹图谱。同时运用统计分析方法，计算 不同物种的遗传距离，得出物种间的亲 缘关系

实验材料 植物样品: 花椰菜1，花椰菜2，花椰菜3

实验材料 植物样品: 花椰菜1，花椰菜2，花椰菜3

实验试剂及仪器 10×buffer: 500mM KCl 100mM Tris-HCl (pH9.0) 0.1% 明胶 1% TritonX-100 MgCl2 2.5mM ４×dNTP: 1mM 引物： 3种RAPD引物 5.0uM 模板： 20ng/μl Taq酶： 5u/μl PCR仪，凝胶成像系统，电泳系统

实验试剂及仪器 10×buffer: 500mM KCl 100mM Tris-HCl (pH9.0) 0.1% 明胶 1% TritonX-100 MgCl2 2.5mM ４×dNTP: 1mM 引物： 3种RAPD引物 5.0uM 模板： 20ng/μl Taq酶： 5u/μl PCR仪，凝胶成像系统，电泳系统

实验方法 １．向无菌的500μl Eppendorf管中依次加入以下溶液。 反应物 体积 10×buffer 2.5μl 4×dNTP(1mM) 2.5μl MgCl2 (25mM) 2.5μl 无菌水 10.5μl Taq酶 (1U/ul) 1μl 引物 2μl 模板DNA(20ng) 4μl 总体积 25μl

实验方法 １．向无菌的500μl Eppendorf管中依次加入以下溶液。 反应物 体积 10×buffer 2.5μl 4×dNTP(1mM) 2.5μl MgCl2 (25mM) 2.5μl 无菌水 10.5μl Taq酶 (1U/ul) 1μl 引物 2μl 模板DNA(20ng) 4μl 总体积 25μl

2．反应体系混匀，离心 3．在ＰＣＲ仪上按以下方式循环 94℃变性 １分钟 36℃退火 １分钟 72℃延伸 ２分钟 经过40个循环 4．７２℃延伸反应7分钟。 5．取20μl反应液加4μl Loading buffer在 6. 1.5％琼脂糖凝胶上120伏，电泳2小时。 7. 在凝胶成像系统上观察记录实验结

2．反应体系混匀，离心 3．在ＰＣＲ仪上按以下方式循环 94℃变性 １分钟 36℃退火 １分钟 72℃延伸 ２分钟 经过40个循环 4．７２℃延伸反应7分钟。 5．取20μl反应液加4μl Loading buffer在 6. 1.5％琼脂糖凝胶上120伏，电泳2小时。 7. 在凝胶成像系统上观察记录实验结

根据RAPD扩增结果计算: 1.遗传相似性系数 S S = 2 Nxy / (Nx + Ny ) Nxy为种间共有的扩增带，Nx为X种具有的扩增带，Ny 为Y种具有的扩增带 2.遗传距离（D） D = 1 － S 结果分析

根据RAPD扩增结果计算: 1.遗传相似性系数 S S = 2 Nxy / (Nx + Ny ) Nxy为种间共有的扩增带，Nx为X种具有的扩增带，Ny 为Y种具有的扩增带 2.遗传距离（D） D = 1 － S 结果分析