西北大学生命科学学院：《微生物》课程实验教案（讲义，共十个实验）

目录《微生物学实验》实验课程简介实验守则.3实验一准备实验-棉塞的制作及实验器血的洗涤包装4细菌的单染色及革兰氏染色.实验二..5实验三细菌大小的测微和特殊结构染色实验，实验四放线菌和霉菌的形态观察9实验五酵母菌形态观察和直接计数法11实验六培养基配制及干湿热灭菌.13实验七从土壤中分离微生物..... 15实验八水的细菌学检查（1）17实验九水的细菌学检查（2）.18实验十实验技能考核20

1 目录 《微生物学实验》实验课程简介. 2 实验守则. 3 实验一 准备实验-棉塞的制作及实验器皿的洗涤包装. 4 实验二 细菌的单染色及革兰氏染色. 5 实验三 细菌大小的测微和特殊结构染色实验. 7 实验四 放线菌和霉菌的形态观察. 9 实验五 酵母菌形态观察和直接计数法. 11 实验六 培养基配制及干湿热灭菌. 13 实验七 从土壤中分离微生物. 15 实验八 水的细菌学检查（1）. 17 实验九 水的细菌学检查（2）. 18 实验十 实验技能考核. 20

《微生物学实验》实验课程简介微生物学是一门实践性、技术性很强的课程，微生物学实验的方法是根据微生物独特的形态、生理、繁殖特征设计的。主要包含三大部分共十次实验内容，第一部分：微主物学基本操作技能。训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，包括油镜的正确使用和显微镜维护、不同微生物的染色、运动、个体和群体形态观察比较、测微技术、培养和分离技术等；第二部分：综合提升实验，在掌握微生物学基本技能的基础上，训练学生独立设计和自主创新，培养学生观察、思考、分析问题的能力。第三部分：实验技能综合考试。该课程的目的：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；进一步了解、深化微生物学的基本理论，加深理解课堂讲授的有关微生物学理论知识，同时通过实验，培养同学观察、思考、分析问题和解决问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约的优良品质。2

2 《微生物学实验》实验课程简介 微生物学是一门实践性、技术性很强的课程，微生物学实验的方法是根据微生物独特的 形态、生理、繁殖特征设计的。主要包含三大部分共十次实验内容，第一部分：微主物学基 本操作技能。训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，包括油镜的正确使用和显微镜维护、 不同微生物的染色、运动、个体和群体形态观察比较、测微技术、培养和分离技术等；第二 部分：综合提升实验，在掌握微生物学基本技能的基础上，训练学生独立设计和自主创新， 培养学生观察、思考、分析问题的能力。第三部分：实验技能综合考试。该课程的目的：训 练学生掌握微生物学最基本的操作技能；进一步了解、深化微生物学的基本理论，加深理解 课堂讲授的有关微生物学理论知识，同时通过实验，培养同学观察、思考、分析问题和解决 问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约的优良品质

实验守则1、实验室内保持干净整洁，勿高声说话和随意走动，保持室内安静。2、进入实验室一定穿实验服，非必要物品禁止带入实验室。不准吸烟、吃喝东西、禁止用嘴移液或用未经清洗的手接触眼晴等。3、要严格按照实验室安全规程操作，避免或者减少气溶胶的产生。万一遇到操作不慎打破盛有菌的试管或三角瓶，皮肤划伤、微生物入眼或口等情况，应立即用清水先处理伤口并报告老师。4、对于泄露或污染的物品或者台面要进行消毒处理，使用75%的酒精进行擦拭。所有污染物要进行统一灭菌后倾倒。5、实验过程中女生长头发不允许披肩，最好束起来并盘到头顶。切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃易爆药品接近火焰。如遇危险，应保持冷静，先关掉火源，再进行有效的灭火处理。6、使用显微镜或其他贵重仪器，要求细心操作，特别爱护。对消耗品和药品要力求节约，用完后放回原处。7、每次实验进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于指定地点。实验室中的菌株和物品禁止私自携带外出。8、每次实验前必须充分预习，了解实验原理，做到心中有数，思路清楚。9、认真做好实验过程中的记录，实验报告必须使用统一的报告单。10、离开实验室前将手洗干净，注意关闭电源，门窗和灯等。m

3 实验守则 1、 实验室内保持干净整洁，勿高声说话和随意走动，保持室内安静。 2、 进入实验室一定穿实验服，非必要物品禁止带入实验室。不准吸烟、吃喝东西、禁 止用嘴移液或用未经清洗的手接触眼睛等。 3、 要严格按照实验室安全规程操作，避免或者减少气溶胶的产生。万一遇到操作不慎 打破盛有菌的试管或三角瓶，皮肤划伤、微生物入眼或口等情况，应立即用清水先 处理伤口并报告老师。 4、 对于泄露或污染的物品或者台面要进行消毒处理，使用 75%的酒精进行擦拭。所有 污染物要进行统一灭菌后倾倒。 5、 实验过程中女生长头发不允许披肩，最好束起来并盘到头顶。切勿使乙醇、乙醚、 丙酮等易燃易爆药品接近火焰。如遇危险，应保持冷静，先关掉火源，再进行有效 的灭火处理。 6、 使用显微镜或其他贵重仪器，要求细心操作，特别爱护。对消耗品和药品要力求节 约，用完后放回原处。 7、 每次实验进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于指定地点。实验室 中的菌株和物品禁止私自携带外出。 8、 每次实验前必须充分预习，了解实验原理，做到心中有数，思路清楚。 9、 认真做好实验过程中的记录，实验报告必须使用统一的报告单。 10、离开实验室前将手洗干净，注意关闭电源，门窗和灯等

实验一准备实验-棉塞的制作及实验器血的洗涤包装一、实验目的1、通过简单的棉塞的制作，训练学生左右手相互协调的能力，为微生物实验中的具体操作打下基础。2、清洗实验器血以及包装，让同学们理解微生物实验过程中无菌的概念，且这一概念贯串整个微生物学任何实验的过程中。3、让同学们理解例如培养血、琼脂、接种针等简单的设计起到非常重要的作用。二、实验原理1、试管塞子或者是三角瓶塞子的作用原理。2、培养皿无菌培养的原理。3、琼脂在培养基中的作用原理。4、接种针的设计原理三、实验材料、仪器和试剂棉花，纱布，线绳，剪刀，培养血，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅。四、实验方法及步骤棉塞制作的过程。培养血包装灭菌过程。五、注意事项重在锻炼学生的动手能力和学习能力以及自我的思考能力。在实践中不断摸索不断学习的过程。结果不要求多而要求精。六、思考题无4

4 实验一 准备实验-棉塞的制作及实验器皿 的洗涤包装 一、 实 验目的 1、通过简单的棉塞的制作，训练学生左右手相互协调的能力，为微生物实验中 的具体操作打下基础。 2、清洗实验器皿以及包装，让同学们理解微生物实验过程中无菌的概念，且这 一概念贯串整个微生物学任何实验的过程中。 3、让同学们理解例如培养皿、琼脂、接种针等简单的设计起到非常重要的作用。 二、 实验原理 1、试管塞子或者是三角瓶塞子的作用原理。 2、培养皿无菌培养的原理。 3、琼脂在培养基中的作用原理。 4、接种针的设计原理。 三、 实 验材料、仪器和试剂 棉花，纱布，线绳，剪刀，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅。 四、 实 验方法及步骤 棉塞制作的过程。 培养皿包装灭菌过程。 五、 注 意事项 重在锻炼学生的动手能力和学习能力以及自我的思考能力。在实践中不断摸 索不断学习的过程。结果不要求多而要求精。 六、 思 考题 无

实验二细菌的单染色及革兰氏染色一、实验目的学习并掌握油镜的使用方法；学习并掌握对细菌进行涂片染色的方法：学习无菌操作技术。二、实验原理1、细菌单染色和革兰氏染色的原理。2、油镜的使用原理。三、实验材料、仪器和试剂B1（枯草芽孢杆菌），B5（金黄色葡萄球菌），B7（大肠杆菌），螺旋菌（口腔）显微镜，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染色液等。四、实验方法及步骤1、细菌的单染色1.1要求：分别制作B1和自身口腔牙垢螺旋菌涂片，染色并观察。1.2过程：涂片→干燥→固定→结晶紫染色（2分钟）→水洗→干燥→镜检。2、细菌的革兰氏染色2.1要求：制作B5和B7的混合涂片，染色并观察（B7比B5多涂一些）。2.2过程：涂片，干燥，固定→结晶紫染色（2分钟）→水洗→碘液（1分钟）→水洗→酒精（15秒）→立刻水洗→番红（2分钟）→水洗→干燥→镜检。3、细菌的群体形态观察（菌落的大小、色泽、透明度、形状、边缘、突起程度）。五、注意事项同学们操作过程中要注意的问题：1）涂片不能太多水？要涂开一些，如果有聚集的现象说明不干净，用去污粉洗干净后重新进行。2）图片不要太厚，要均匀，固定温度不能太高。（都要问为什么？）3）染料只要覆盖涂片的区域即可。4）为什么我们要采取混合图片的方式呢？强调对照的重要性。5

5 实验二 细菌的单染色及革兰氏染色 一、 实 验目的 学 习并掌握油镜的使用方法； 学 习并掌握对细菌进行涂片染色的方法； 学 习无菌操作技术。 二、 实验原理 1、细菌单染色和革兰氏染色的原理。 2、油镜的使用原理。 三、 实 验材料、仪器和试剂 B1（枯草芽孢杆菌），B5（金黄色葡萄球菌），B7（大肠杆菌），螺旋菌（口腔）， 显微镜，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染色液等。 四、 实 验方法及步骤 1、细菌的单染色 1.1 要求：分别制作 B1 和自身口腔牙垢螺旋菌涂片，染色并观察。 1.2 过程：涂片 → 干燥 → 固定 → 结晶紫染色（2 分钟）→ 水洗 →干 燥 → 镜检。 2、细菌的革兰氏染色 2.1 要求：制作 B5 和 B7 的混合涂片，染色并观察（B7 比 B5 多涂一些）。 2.2 过程：涂片，干燥，固定 → 结晶紫染色（2 分钟）→ 水洗 → 碘液（1 分钟）→ 水洗 → 酒精（15 秒）→ 立刻水洗 → 番红（2 分钟）→ 水洗 → 干燥 → 镜检。 3、细菌的群体形态观察（菌落的大小、色泽、透明度、形状、边缘、突起程度）。 五、 注 意事项 同学们操作过程中要注意的问题： 1) 涂片不能太多水？要涂开一些，如果有聚集的现象说明不干净，用去污 粉洗干净后重新进行。 2) 图片不要太厚，要均匀，固定温度不能太高。（都要问为什么？） 3) 染料只要覆盖涂片的区域即可。 4) 为什么我们要采取混合图片的方式呢？强调对照的重要性

5）如何快速的定位自己要观察的对象。6）重点说明脱色的过程和如何把握脱色的过程。六、思考题1）如何判断显微镜下视野中看到的东西是否是我们需要观察的对象？分析多种可能性，所得结论对应的依据是什么。2）怎样确定一株未知菌株是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，具体过程怎样进行？自己革兰氏染色过程结果分析？3）6

6 5) 如何快速的定位自己要观察的对象。 6) 重点说明脱色的过程和如何把握脱色的过程。 六 、思考题 1) 如何判断显微镜下视野中看到的东西是否是我们需要观察的对象？分析多种 可能性，所得结论对应的依据是什么。 2) 怎样确定一株未知菌株是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，具体过程怎样进行？ 3) 自己革兰氏染色过程结果分析？

实验三细菌大小的测微和特殊结构染色实验一、实验目的1、掌握细菌大小的测微技术。2、掌握细菌芽孢和荚膜的染色方法。3、掌握细菌运动运动性的观察方法（悬滴法）。二、实验原理1、对细菌大小进行测量的原理。2、芽孢和荚膜的染色原理。3、细菌运动性观察和判别的原理。三、实验材料、仪器和试剂枯草芽孢杆菌（B1）、金黄色葡萄球菌（B5）、原核固氮菌，显微镜，载玻片，酒精灯，接种针，水，镜台测微尺，目镜测微尺，灭菌锅，各种染色液等。四、实验方法及步骤1、细菌大小测微的实验1.1用镜台测微尺分别对低倍镜、高倍镜和油镜的目镜测微尺进行校正。1.2分别对B1、B5进行单染色。1.3在油镜条件下，用目镜测微尺分别对B1、B5进行观察和测量（选五个不同的菌体取其平均值）。2、细菌的芽孢染色实验涂片、干燥、固定，加数滴孔雀绿染液于玻片上，微火加热至燃料冒蒸汽并维持，计时5分钟，待玻片冷却后水洗，蕃红复染2分钟，然后水洗，干燥，镜检。3、荚膜染色法用结晶紫单染色法对原核固氮菌进行染色（涂片稍厚，不能加热进行干燥和固定，稍水洗），镜检时菌体细胞外一圈透明区域即为荚膜。4、用悬滴法观察细菌的运动性4.1分别取1环B1和B5的滴悬液于盖玻片上，翻转后覆于凹玻片上。7

7 实验三 细菌大小的测微和特殊结构染色 实验 一、 实 验目的 1、掌握细菌大小的测微技术。 2、掌握细菌芽孢和荚膜的染色方法。 3、掌握细菌运动运动性的观察方法（悬滴法）。 二、 实验原理 1、对细菌大小进行测量的原理。 2、芽孢和荚膜的染色原理。 3、细菌运动性观察和判别的原理。 三、 实 验材料、仪器和试剂 枯草芽孢杆菌（B1）、金黄色葡萄球菌（B5）、原核固氮菌，显微镜，载玻片， 酒精灯，接种针，水，镜台测微尺，目镜测微尺，灭菌锅，各种染色液等。 四、 实 验方法及步骤 1、细菌大小测微的实验 1.1 用镜台测微尺分别对低倍镜、高倍镜和油镜的目镜测微尺进行校正。 1.2 分别对 B1、B5 进行单染色。 1.3 在油镜条件下，用目镜测微尺分别对 B1、B5 进行观察和测量（选五 个不同的菌体取其平均值）。 2、细菌的芽孢染色实验 涂片、干燥、固定，加数滴孔雀绿染液于玻片上，微火加热至燃料冒蒸汽并 维持，计时 5 分钟，待玻片冷却后水洗，蕃红复染 2 分钟，然后水洗，干燥，镜 检。 3、荚膜染色法 用结晶紫单染色法对原核固氮菌进行染色（涂片稍厚，不能加热进行干燥和 固定，稍水洗），镜检时菌体细胞外一圈透明区域即为荚膜。 4、用悬滴法观察细菌的运动性 4.1 分别取 1 环 B1 和 B5 的滴悬液于盖玻片上，翻转后覆于凹玻片上

4.2镜检：用低倍镜找到液滴的边缘，后移至高倍镜下观察菌体的运动性（视野光线要调暗）。五、注意事项1）芽胞染色时染料在加热的过程中不能干，同时也不能太多导致流动地到处都是。示范一下操作。2）拿到水池旁边。加热完冲水前一定要冷却一会，要不热胀冷缩导致玻璃炸裂。3）荚膜染色时涂片不能用火固定。六、思考题1）用简单染色是否可以观察到细菌的芽孢？原因是什么？2）芽孢染色过程中只是大量的游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？3）如何判断视野中观察到的细胞是在运动还是在做布朗运动？判断的依据是什么？4）分别画出芽孢和荚膜的形态。5)计算出B1和B5的菌体大小。描述B1和B5的运动特征，并判断其是否具有鞭毛结构。6)在芽孢染色时，当用孔雀绿对菌体染色后，为什么不能立即水洗？7)8

8 4.2 镜检：用低倍镜找到液滴的边缘，后移至高倍镜下观察菌体的运动性（视 野光线要调暗）。 五、 注 意事项 1) 芽胞染色时染料在加热的过程中不能干，同时也不能太多导致流动地到处都 是。示范一下操作。 2) 拿到水池旁边。加热完冲水前一定要冷却一会，要不热胀冷缩导致玻璃炸裂。 3) 荚膜染色时涂片不能用火固定。 六、 思 考题 1) 用简单染色是否可以观察到细菌的芽孢？原因是什么？ 2) 芽孢染色过程中只是大量的游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为 这是什么原因？ 3) 如何判断视野中观察到的细胞是在运动还是在做布朗运动？判断的依据是什 么？ 4) 分别画出芽孢和荚膜的形态。 5) 计算出 B1 和 B5 的菌体大小。 6) 描述 B1 和 B5 的运动特征，并判断其是否具有鞭毛结构。 7) 在芽孢染色时，当用孔雀绿对菌体染色后，为什么不能立即水洗？

实验四）放线菌和霉菌的形态观察一、实验目的学习霉菌和放线菌个体形态以及群体形态的观察。霉菌形态相比于细菌更为丰富，是分类的重要依据。从菌丝的形态，孢子的形态，孢子梗的形态和长度等，孢子的形态，大小，表面结构或者颜色等都能够区分不同的霉菌，因此认识了解霉菌形态是分类的重要依据。1.学习并掌握观察放线菌、霉菌个体形态的基本方法2.观察不同放线菌、霉菌的形态特征二、实验原理1、放线菌（原核微生物）由菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为三个部分：营养菌丝、气生菌丝、孢子丝。孢子丝由气生菌丝分化形成，呈螺旋状，波浪形或分支状等。2、霉菌是一类可产生复杂分支菌丝的真核微生物的统称。菌丝体也同样分为三个部分：营养菌丝、气生菌丝、孢子丝。孢子丝生长到一定阶段分化产生。霉菌菌丝和孢子的宽度通常要比放线菌大。三、实验材料、仪器和试剂白色链球菌A2、兰色链球菌A9、根霉F1、青霉F7、曲霉F9，显微镜，载玻片，酒精灯，接种针，水，培养皿，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染色液等。四、实验方法及步骤1.对放线菌个体形态和群体形态的观察1.1将用扦片法培养好的放线菌扦片放于载玻片上，观察菌丝1.2用印片法观察放线菌的孢子丝和孢子1.3观察放线菌的群体形态，包括质地、大小、色泽、突起程度、形态、气味、湿润程度等。2.对霉菌个体形态和群体形态的观察2.1描述F1、F7、F9菌群的形态（大小、菌丝、孢子、正反面色泽、湿润程度等）9

9 实验四 放线菌和霉菌的形态观察 一、 实 验目的 学习霉菌和放线菌个体形态以及群体形态的观察。霉菌形态相比于细菌更为 丰富，是分类的重要依据。从菌丝的形态，孢子的形态，孢子梗的形态和长度等， 孢子的形态，大小，表面结构或者颜色等都能够区分不同的霉菌，因此认识了解 霉菌形态是分类的重要依据。 1.学习并掌握观察放线菌、霉菌个体形态的基本方法 2.观察不同放线菌、霉菌的形态特征 二、 实验原理 1、放线菌（原核微生物）由菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为三个部分： 营养菌丝、气生菌丝、孢子丝。孢子丝由气生菌丝分化形成，呈螺旋状，波 浪形或分支状等。 2、霉菌是一类可产生复杂分支菌丝的真核微生物的统称。菌丝体也同样分为三 个部分：营养菌丝、气生菌丝、孢子丝。孢子丝生长到一定阶段分化产生。 霉菌菌丝和孢子的宽度通常要比放线菌大。 三、 实 验材料、仪器和试剂 白色链球菌 A2、兰色链球菌 A9、根霉 F1、青霉 F7、曲霉 F9，显微镜，载 玻片，酒精灯，接种针，水，培养皿，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染 色液等。 四、 实 验方法及步骤 1.对放线菌个体形态和群体形态的观察 1.1 将用扦片法培养好的放线菌扦片放于载玻片上，观察菌丝 1.2 用印片法观察放线菌的孢子丝和孢子 1.3 观察放线菌的群体形态，包括质地、大小、色泽、突起程度、形态、 气味、湿润程度等。 2.对霉菌个体形态和群体形态的观察 2.1 描述 F1、F7、F9 菌群的形态（大小、菌丝、孢子、正反面色泽、湿 润程度等）

2.2对F1的观察2.2.1将F1平板直接置于载物台上，用低倍镜观察其假根、匍匐丝、孢子梗孢囊等。2.2.2取F1菌丝作透明剂浸片，进一步观察其形态2.3对F7观察取F7菌丝作透明剂浸片，观察其帚状根形态2.4对F9观察取F9菌丝作透明剂浸片，观察其足细胞、分生孢子梗、分生孢子等。五、注意事项六、思考题1）你根据那些特征来区分我们观察的三种霉菌和两种放线菌？2）镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？10

10 2.2 对 F1 的观察 2.2.1 将 F1 平板直接置于载物台上，用低倍镜观察其假根、匍匐丝、孢子梗、 孢囊等。 2.2.2 取 F1 菌丝作透明剂浸片，进一步观察其形态 2.3 对 F7 观察 取 F7 菌丝作透明剂浸片，观察其帚状根形态 2.4 对 F9 观察 取 F9 菌丝作透明剂浸片，观察其足细胞、分生孢子梗、分生孢子等。 五、 注 意事项 六、 思 考题 1) 你根据那些特征来区分我们观察的三种霉菌和两种放线菌？ 2) 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？