厦门大学：《生物化学实验》课程教学资源（讲稿）总糖和还原糖的测定

实验二还原糖的测定

实验二 还原糖的测定

实验目的掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法

实验目的 掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作 方法

实验原理单糖以及含有游离醛基或酮基的寡糖具有还原性，属于还原糖类：而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。还原糖的测定方法多种，本实验采用间接滴定法

实验原理 单糖以及含有游离醛基或酮基的寡糖， 具有还原性，属于还原糖类； 而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用 多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测 定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖的测定方法多种，本实验采用间 接滴定法

在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价的氧化亚铜，氧化亚铜在酸性环再用标准境中与一定量的过量碘起反应，硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还原糖的含量

在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还 原成一价的氧化亚铜，氧化亚铜在酸性环 境中与一定量的过量碘起反应， 再用标准 硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还原 糖的含量

反应方程式：2NaOH + CuSO,=Cu(OH), ↓ + Na,SOCOOKCOOKCu(OH), +H-C-OH = H-C-0Cu+2H20H-C-OHH-C-0COONaCOONa酒石酸甲钠可溶性的氧化铜络合物COOKCOOKCHOCOOHH-C-OH-C-OH2Cu+（CHOH）4+2H2O=2+（CHOH)4H-C-0H-C-OHCH2OHCH2OHCoONaCooNa葡萄糖酸葡萄糖酒石酸甲钠+Cuz0

2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O H―C―OH H―C―O COONa COONa Cu + 2 H2O 酒石酸甲钠 可溶性的氧化铜络合物 COOK H― C ―O H―C ―O COONa Cu CHO （CHOH）4+ 2 H2O = 2 CH2OH COOK H― C ―OH H―C―OH COONa COOH （ CHOH）4 + Cu2O↓ CH2OH + + 2 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸 反应方程式：

I03+5I+6H312+3H202+Cu20 + I2 + H ++Cu+I-+H202-S406 + 2 1I2 + 2 S203因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原糖的含量

IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O + Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O + 2+ I2 + 2 S2O3 S4O6 + 2 I¯ 2- 2- 因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度 的标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还 原糖的含量

三、试剂与器材样品：标准葡萄糖溶液、待测糖溶液1.2.1试剂：（1）铜试剂;；（2） 0.005 mo1/L：（3）2%碘化钾溶液；（4）硫代硫酸钠溶液；0.5mg/mL标准葡萄糖溶液；（5）1%淀粉指示剂。3.器材：碱式滴定管、恒温水浴锅

三、试剂与器材 1. 样品：标准葡萄糖溶液、待测糖溶液 2. 试剂：（1）铜试剂；（2）0.005 mol/L 硫代硫酸钠溶液；（3）2%碘化钾溶液；（4） 0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液；（5）1％淀粉 指示剂。 3. 器材：碱式滴定管、恒温水浴锅

四、操作步骤1.取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号试沸水浴中煮沸5分钟铜试剂H20标准葡萄糖总糖水解液剂(mL)(mL)(mL)(mL)管号1空2白4实验22R4标准1114实验21141待测24总糖224

四、操作步骤 1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6个 小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。 试 剂 管号 H2O (mL) 标准葡萄糖 （mL） 总糖水解液 （mL） 铜试剂 （mL） 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟 空 白 实 验 1 2 4 2 2 4 标 准 实验 1 1 1 4 2 1 1 4 待测 总糖 1 2 4 2 2 4

2．各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分散后倾入相应的三角瓶中：3.分别在每个试管中加入2mL2%碘化钾溶液和2mL2mo1/LH2S04，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次4.用0.005mo1/LNaS,03滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止

2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀 分散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的 三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止

五、计算：0.5 (mg/ml)X=X（V空－V未知）V空一V标X =(X1+X2)/2

五、计算： X = 0.5（mg/ml） V空 －V标 X（V空－V未知） X =(x1+x2)/2