厦门大学：《微生物学实验》课程教学课件（讲稿）化学消毒剂杀菌效果的定量测定

实验10化学消毒剂杀菌效果的定量测定目的要求了解消毒方法掌握化学消毒剂杀菌效果定量测定技术二、简介使用化学消毒剂进行消毒是最常用的消毒方法之一

实验 10 化学消毒剂杀菌效果的定量测定 二、简介 使用化学消毒剂进行消毒是最常用的消毒方 法之一。 一、目的要求  了解消毒方法  掌握化学消毒剂杀菌效果定量测定技术

自前已投入应用的化学消毒剂种类较多按其化学结构的不同可分为醛类、酚类、醇类、过氧化物类、季铵盐类、含氯化合物、含碘化合物及烷基化剂等十几类不同类或同一类不同种的化学消毒剂的杀菌效果有所不同，有的可杀灭一切微生物，有的仅能杀灭微生物营养体，不能杀灭芽胞和病毒

目前已投入应用的化学消毒剂种类较多， 按其化学结构的不同可分为醛类、酚类、 醇类、过氧化物类、季铵盐类、含氯化 合物、含碘化合物及烷基化剂等十几类。 不同类或同一类不同种的化学消毒剂的 杀菌效果有所不同，有的可杀灭一切微 生物，有的仅能杀灭微生物营养体，不 能杀灭芽胞和病毒

1.消毒剂杀菌效果的测定方法很多，其中悬液定量法是最常用的一种测定方法2.测定时将一定量的菌悬液加入消毒剂溶液内，作用一定时间后用中和剂终正消毒剂的作用，取样测定残存的菌数，并与对照组的菌数相比较，即可测得消毒剂杀菌结果（以杀灭率表示）

1.消毒剂杀菌效果的测定方法很多，其中 悬液定量法是最常用的一种测定方法。 2.测定时将一定量的菌悬液加入消毒剂溶 液内，作用一定时间后用中和剂终止消 毒剂的作用，取样测定残存的菌数，并 与对照组的菌数相比较，即可测得消毒 剂杀菌结果（以杀灭率表示）

三、操作程序指示微生物：大肠杆菌、枯草杆菌1、将菌液进行活菌计数，并用稀释液稀释成含菌量为5×105～5×10fu/mL的菌悬液2、将消毒剂用灭菌蒸馏水稀释成2个不同浓度各吸取4.5mL分别加入2个试管内，放20±2℃水浴中。3、待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在2个试管中分别加入0.5mL菌悬液（含菌量为5×105～5×10fu/mL），混匀并开始记时

三、操作程序 指示微生物：大肠杆菌、枯草杆菌 1、将菌液进行活菌计数，并用稀释液稀释成含 菌量为5×105～5×106cfu/mL的菌悬液。 2、将消毒剂用灭菌蒸馏水稀释成2个不同浓度 ，各吸取4.5mL分别加入2个试管内，放20±2℃水浴 中。 3、待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在2 个试管中分别加入0.5mL菌悬液（含菌量为5×105～ 5×106cfu/mL），混匀并开始记时

j（每隔7.5min），各取4、分别于4个不同间隔时间0.5mL菌液混合液移入4.5mL中和剂中混匀。5、中和10min，作适当稀释后进行活菌计数。(PBS)6、对照以洗脱液代替消毒液，其余同实验组进行。7、按不同稀释度推算出每个样本存活菌数。按下式计算杀灭率：杀灭率（%）=对照组存活菌数-实验组存活菌数X100对照组存活菌数

4、分别于4个不同间隔时间（每隔7.5min），各取 0.5mL菌液混合液移入4.5mL中和剂中混匀。 5、中和10 min，作适当稀释后进行活菌计数。 6、对照以洗脱液（PBS）代替消毒液，其余同实验 组进行。 7、按不同稀释度推算出每个样本存活菌数。 按下式计算杀灭率： 杀灭率（%）=对照组存活菌数-实验组存活菌数 对照组存活菌数 ×100

2、测定消毒、中和作用实验组对照组4.5ml消毒剂样品PBS4.5ml菌悬液0.5ml0.5ml混匀（计时），作用10min各取0.1ml移入一含4.5ml中和剂的试管中，混匀（计时），作用10min

 消毒、中和作用 实验组 对照组 消毒剂样品 4.5ml PBS 4.5ml 菌悬液 0.5ml 0.5ml 混匀（计时），作用10 min 各取0.1ml移入一含4.5ml中和剂的试管中，混匀（计 时），作用10min 2、测定

存活菌数的测定实验组：直接取中和反应后的溶液0.5mL测定（倾注平板法：2个平板/样品）。对照组：取加中和剂后的菌液0.5ml，用PBS进行适当稀释（倾注（10-3、10-4 ）后，取稀释液（10-3、10-4）0.1ml测定平板法，2个平板/稀释度，做2个稀释度）。平板置37℃培养48h，计算菌落数。按不同稀释度推算出每个样本存活菌数。按下式计算杀灭率：杀灭率（%）=对照组存活菌数-实验组存活菌数X 100对照组存活菌数

存活菌数的测定 实验组：直接取中和反应后的溶液0.5mL测定（倾注平板法， 2个平板/样品）。 对照组：取加中和剂后的菌液0.5ml，用PBS进行适当稀释 （10-3 、10-4 ）后，取稀释液（10-3、10-4 ）0.1ml测定（倾注 平板法，2个平板/稀释度，做2个稀释度）。 平板置37℃培养48 h，计算菌落数。按不同稀释度推算出每 个样本存活菌数。按下式计算杀灭率： 杀灭率（%）=对照组存活菌数-实验组存活菌数 对照组存活菌数 ×100

四、注意事项注意控制好用于测定的菌体悬液量。要注意选择合适的中和剂，五、思考题如何定量测定某种消毒剂对皮肤的消毒效果？试拟出试验步骤那些因素会影响消毒剂的杀菌效果？试列举说明

四、注意事项  注意控制好用于测定的菌体悬液量。  要注意选择合适的中和剂。 五、思考题  如何定量测定某种消毒剂对皮肤的消毒效果？ 试拟出试验步骤。  那些因素会影响消毒剂的杀菌效果？试列举 说明

实验报告供测消毒剂样品对微生物的杀灭率见表1表1供测消毒剂样品对微生物的杀灭率项目平均菌落数杀灭率回收菌落数(cfu/mL)( cfu/mL)2实验组对照组10-3对照组10-4

实验报告 供测消毒剂样品对微生物的杀灭率见表1 表1 供测消毒剂样品对微生物的杀灭率 项目 回收菌落数（cfu/mL） 平均菌落数 （ cfu/mL） 杀灭率 1 2 实验组 对照组10-3 对照组10-4