贵州师范大学：《生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）细菌的革兰氏染色法

细菌的革兰氏染色法

细菌的革兰氏染色法

目的要求学习并掌握革兰氏染色的方法

一、目的要求 学习并掌握革兰氏染色的方法

二、实验材料1.菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。2.染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲苯等

二、实验材料 1.菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌。 2.染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘 液、95%乙醇、番红复染液。 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒 精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲 苯等

三、基本原理革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创立

三、基本原理 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用 的一种鉴别染色法。 1884年由丹麦医师Gram创立

细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-

细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液 媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的 细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此 可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳 性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G- ）

为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽孢抱的杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都成负反应

为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如 碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色， 阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝 大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都 成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数 致病性的无芽孢杆菌都成负反应

革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据

革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化 学组成和生理性质上有很多差别，染色 反应不一样。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊 的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与 碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱 色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染 料差，易脱色，这是染色反应的主要依 据

另外，与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色

另外，与细菌细胞壁的化学组成及结 构有关。 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高， 脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽 聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘 复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色

革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高，肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质使细胞壁通透性增加，结晶紫一一碘复合物易被抽出，于是被脱色

❖革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高， 肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质， 使细胞壁通透性增加，结晶紫——碘复 合物易被抽出，于是被脱色

再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制

再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低， 在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱 性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相 反。所以染色时的条件要严格控制