厦门大学：《微生物学实验》课程教学课件（讲稿）生理生化实验结果观察

实验八--十三 生理生化实验结果观察

本次实验内容（淀粉）水解试验、实验八：大分子物质（乳糖）实验九：糖发酵试验实验十--十三：IMViC试验（吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验柠檬酸盐试验）

 实验八：大分子物质（淀粉）水解试验  实验九：糖发酵试验 （乳糖）  实验十-十三：IMViC试验 （吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、 柠檬酸盐试验）

实验八淀粉水解试验(StarchHydrolysisTest)一、实验目的Purpose证明不同微生物胞外淀粉酶水解淀粉能力的不同。二、实验原理Principle、微生物对大分子物质如淀粉、蛋自质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将天分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶

一、实验目的 Purpose 证明不同微生物胞外淀粉酶水解淀粉能力的不同。 二、实验原理 Principle  微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生 的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水 解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。  淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，这些过程均可通过观察细 菌菌落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀 粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶

固体淀粉培养基一加碘液之前固体淀粉培养基一加碘液之后蓝色说明存在淀粉。右边菌落周围的透明圈证明右边的微生物产生了胞外淀粉酶水解了周围的淀粉

固体淀粉培养基—加碘液之前 固体淀粉培养基—加碘液之后. 蓝色说明存在淀粉。 右边菌 落周围的透明圈证明右边的 微生物产生了胞外淀粉酶， 水解了周围的淀粉

实验材料三、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌：接种环、无菌平板、卢戈氏碘液

三、 实验材料 大肠杆菌、枯草芽胞杆菌； 接种环、无菌平板、卢戈氏碘液

四、实验步骤procedure1.将固体淀粉培养基无菌操作制成平板，用记号笔在平板底部划一条直线分成两部分，另取一块平板做空白对照。2.如图所示将大肠杆菌和枯草芽胞杆菌分别在左右两部分划线接种，并作好标记，3.将平板倒置在37℃温箱中培养24h。B.subtilisE.coli

四、 实验步骤 procedure 1. 将固体淀粉培养基无菌操作制成平板，用记号笔在 平板底部划一条直线分成两部分，另取一块平板做 空白对照。 2. 如图所示将大肠杆菌和枯草芽胞杆菌分别在左右两 部分划线接种，并作好标记。 3. 将平板倒置在37℃温箱中培养24h

4，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低

4. 观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子， 滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平 板，使碘液均匀铺满整个平板。 如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉己被 水解，为阳性。透明圈的大小可初步判断该 菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外淀粉酶 活力的高低

实验九糖发酵实验CarbohydrateFermentationTests一、实验目的 Purpose1了解微生物发酵糖类能力的大小。2.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法

一、实验目的 Purpose 1. 了解微生物发酵糖类能力的大小。 2. 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法

二、实验原理Principle糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)，有些细菌只产酸不产气。例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气：伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白陈、指示剂（酚红）、倒置的德汶氏小管（又名杜氏小管）和不同的糖类。当发酵产酸时，酚红指示剂转变为黄色。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明

二、实验原理 Principle 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细 菌的鉴定上尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源， 但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌 能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如 氢气、甲烷、二氧化碳等)，有些细菌只产酸不产气。例如， 大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡 萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖 产酸产气，不能分解乳糖。 发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（酚红）、倒置的德汉 氏小管（又名杜氏小管）和不同的糖类。当发酵产酸时，酚 红指示剂转变为黄色。气体的产生可由倒置的德汉氏小管 中有无气泡来证明

pH值高于pH值低于6.8酚红指示剂呈黄色，7.4呈深桃红色。如果微生物发酵糖产酸，会导致pH降低，如果微生物不发酵糖，pH值可能保持中性。如果微生物不发酵糖，而利用蛋白陈，则会产生氨，氨的积累将提高pH值

pH值低于6.8酚红指示剂呈黄色， pH值高于 7.4呈深桃红色。 如果微生物发酵糖产酸， 会导致pH降低，如果微生物不发酵糖，pH 值可能保持中性。如果微生物不发酵糖，而 利用蛋白胨，则会产生氨，氨的积累将提高 pH值