贵州师范大学：《生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）酵母菌的简单染色和血细胞计数板计数

酵母菌的简单染色和血细胞计数板计数

酵母菌的简单染色和 血细胞计数板计数

实验目的一、初步了解酵母菌的形态特征和区分死活细胞。二、巩固显微镜操作技术

实验目的 一、初步了解酵母菌的形态特征和区分死活细胞。 二、巩固显微镜操作技术

实验材料菌种：酿酒酵母溶剂和试剂：生理盐水、吕氏碱性美蓝染液仪器和其他用品：普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、接种环酒精灯、三角烧瓶

菌种：酿酒酵母 溶剂和试剂：生理盐水、吕氏碱性美蓝染液 仪器和其他用品：普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、 酒精灯、三角烧瓶。 实验材料

实验原理酵母菌是不运动的单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形细胞大小为1-5um×5-30um，大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此酵母活细胞是无色的而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别

实验原理 • 酵母菌是不运动的单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形。 细胞大小为1-5mm×5-30mm，大多数酵母菌以出芽方式进 行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。 • 美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，还原型无 色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈 代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型。因此酵母活细胞是无色的， 而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别

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实验步骤二美蓝染液水浸片法1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，于酿酒酵母合成培养基中取少量菌体置于染液中混合均匀。2、用镊子取一片盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。3、低倍镜及高倍镜镜检：将制片放置3分钟，观察酵母菌形态和出芽情况，并根据颜色区分死活细胞4、染色30分钟后再次观察注意死活细胞比例是否发生变化

实验步骤二 美蓝染液水浸片法 1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，于酿酒酵母合成培 养基中蘸取少量菌体置于染液中混合均匀。 2、用镊子取一片盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾 斜并覆盖在菌液上。 3、低倍镜及高倍镜镜检：将制片放置3分钟，观察酵母菌形态和出芽情 况，并根据颜色区分死活细胞。 4 、染色30分钟后再次观察注意死活细胞比例是否发生变化

获得本次实验成功的关键（1）活细胞是透明的，因此在进行显微镜计数应适当减低视野亮度，以增大反差。(2)进行显微计数时应现在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中心，再换高倍镜观察和计数。(3)用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。（(4)滴加染液要适中，否则要盖玻片覆盖时。染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。（5）盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡

获得本次实验成功的关键 ⑴ 活细胞是透明的，因此在进行显微镜计数应适当减低视野亮 度，以增大反差。 ⑵进行显微计数时应现在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计 数室后将其移至视野中心，再换高倍镜观察和计数。 ⑶用接 种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 ⑷ 滴加染液要适中，否则要盖玻片覆盖时。染液过多会溢出，过 少会产生大量气泡。⑸ 盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气 泡