贵州师范大学：《生物化学与分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验七 酶的活性测定及专一性

实验七酶的活性及专一性测定

实验七 酶的活性及专一性测定

实验目的.....................实验原理试剂器材实验步骤思考题5

1 实验目的 2 实验原理 3 试剂器材 4 实验步骤 5 思考题

实验日的了解酶的活性测定方法及其对底物催化的专一性

实验目的 了解酶的活性测定方法及其对底物催化 的专一性

实验原理酶的活性：酶催化特定化学反应的能力。酶的活性单位：指在一定的作用条件下，酶促反应中单位时间内作用物的消耗量或产物的生成量。睡液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色，以此证明酶催化底物的专一性

实验原理 酶的活性：酶催化特定化学反应的能力。 酶的活性单位：指在一定的作用条件下，酶促反应中单位时间内 作用物的消耗量或产物的生成量。 唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、 麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂 中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不 能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作 用呈色，以此证明酶催化底物的专一性

器材试剂·器材：试管、移液管、滴瓶、温度计、恒温水浴箱，冰箱等。·试剂：0.5%淀粉溶液（含0.3%NaC1）、2%蔗糖溶液、班氏试剂、稀释睡液、碘一碘化钾溶液

器材试剂 • 器材：试管、移液管、滴瓶、温度计、恒 温水浴箱，冰箱等。 • 试剂：0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）、2% 蔗糖溶液、班氏试剂、稀释唾液、碘-碘化 钾溶液

实验步骤1.睡液的稀释：取10支试管，分别编上号1-6，取10m1睡液加入1号试管后从中取出1m1加入2号试管，依次梯度稀释。试管6#1#2#3#4#5#睡液1101/ml9蒸馏水99099/ml

实验步骤 试管 1# 2# 3# 4# 5# 6# 唾液 /ml 10 1 1 1 1 1 蒸馏水 /ml 0 9 9 9 9 9 1.唾液的稀释：取10支试管，分别编上号1-6， 取10 ml唾液加入1号试管后从中取出1ml加入2 号试管，依次梯度稀释

各取上述稀释的睡液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向6支试管内同时加入1m1的0.5%的淀粉溶液，振荡混匀后放入37℃恒温水浴中，10分钟后取出，滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，计算酶的活性，用于后续实验

各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号 的试管里，然后向6支试管内同时加入1ml的0.5％的 淀粉溶液，振荡混匀后放入37℃恒温水浴中，10分 钟后取出，滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选 取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，计算酶的 活性，用于后续实验

2.淀粉酶的专一性：取3个试管，分别编号，按下表操作，记录实验现象。1#2#3#试管编号111睡液淀粉酶/ml30.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸馏水/ml摇匀，37℃水浴15min222Benedict/ml摇匀，沸水煮2min观察记录结果

2. 淀粉酶的专一性：取3个试管，分别编号，按下 表操作，记录实验现象。 试管编号 1# 2# 3# 唾液淀粉酶/ml 1 1 1 0.5%淀粉溶液/ml 3 2%蔗糖溶液/ml 3 蒸馏水/ml 3 摇匀，37℃水浴15min Benedict/ml 2 2 2 摇匀，沸水煮2min 观察记录结果

思考题每组中蒸馏水分别起什么作用？将酶煮沸10min，重复以上实验可能会有什么结果？

思考题 每组中蒸馏水分别起什么作用？将 酶煮沸10min，重复以上实验可能会有什 么结果？