贵州师范大学：《生物化学与分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验二-甲醛滴定法测定氨基氮

实验二甲醛滴定法测定氨基氮

甲醛滴定法测定氨基氮 实验二

一、实验自的掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点

一、实验目的 掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点

实验原理二氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：R-CH-COO- R-CH-COO-+ H+NH2十MH3一NH3是弱酸，完全解离时PH为11一12或更高，若用碱滴定一NH3所释放的H+来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点

二、实验原理 ⚫ 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： ⚫ －NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－ NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很 难准确指示滴定终点

R-CH-COO′ R-CH-COO- + H+_NaOH中和NH2MH3HCHOWR-CH-COONHCH20HHCHOR-CH-COO"N(CH20H)2常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3释放H十，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚然的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚献作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定

⚫ 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物， 使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴 定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞 作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定

三实验器材锥形瓶、烧杯、刻度试管、碱式滴定管、吸管

三、实验器材 锥形瓶、烧杯、刻度试管、碱式滴定管、吸管

四、实验试剂1.0.05mol/L标准甘氨酸溶液准确称取375mg甘氨酸，溶解后定容至100ml。2.0.02mol/L标准氢氧化钠溶液3.酚酰指示剂0.5%酚酰的50%乙醇溶液。4.中性甲醛溶液在50ml36一37%分析纯甲醛溶液中加入1ml0.5%酚酰乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中

四、实验试剂 1. 0.05mol/L标准甘氨酸溶液 准确称取375mg 甘氨酸，溶解后定容至100ml。 2. 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液 3. 酚酞指示剂 0.5 ％酚酞的50 ％乙醇溶液。 4. 中性甲醛溶液 在50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入1ml 0.5％酚酞乙 醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密 闭的玻璃瓶中

五、实验操作213编号220标准甘氨酸（mL）557H20(mL)555酚指示剂（滴）222中性甲醛（mL）1、取3个25ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2m和水5ml，混匀。向3号瓶内加入7ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酰指示剂，混匀后各加2ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上步骤2次，记录NaOH消耗量，取平均值计算氨基氮回收率

五、实验操作 编号 1 2 3 标准甘氨酸（mL） 2 2 0 H2O（mL） 5 5 7 酚酞指示剂（滴） 5 5 5 中性甲醛（mL） 2 2 2 1、取3个25 ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨 酸溶液2ml和水5ml，混匀。向3号瓶内加入7 ml水。然后向三个瓶中各加 入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标 准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上步骤2次，记录NaOH消耗 量，取平均值计算氨基氮回收率

213编号222待测甘氨酸（mL）555H20(mL)555酚指示剂（滴）222中性甲醛（mL）2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数

2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，取平 均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。 编号 1 2 3 待测甘氨酸（mL） 2 2 2 H2O（mL） 5 5 5 酚酞指示剂（滴） 5 5 5 中性甲醛（mL） 2 2 2

六、纟结果处理1.回收率计算：t实际测得量甘氨酸氨基氮回收率%三X100gt加入理论量公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008

六、结果处理 1. 回收率计算： 公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液 毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘 以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008

1.氨基氮的计算：(V*-V)XNNa0HX14.008氨基氮（毫克/毫升）=2公式中V为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度

1. 氨基氮的计算： 公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度