贵州师范大学：《生物化学与分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验三 蒽酮比色定糖法

实验三：葱酮比色定糖法

实验三：蒽酮比色定糖法

一、实验目的学习分光光度法的基本原理学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法

一、实验目的  学习分光光度法的基本原理  学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法

二、实验原理分光光度法基本原理：溶液中的物质在光的照射激发下。产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系。即符合于比色原理一一比尔定律

二、实验原理  分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收 效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当 某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱 的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理— —比尔定律

朗伯一比尔定律KAb一C6gA：为吸光度，T：为透射比，是投射光强度比上入射光强度C：为吸光物质的浓度b：为吸收层厚度物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时，起其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收层厚度b成正比

 朗伯-比尔定律  A = l g ( 1 / T ) = K b c A：为吸光度, T ： 为 透 射 比 , 是 投 射 光 强 度 比 上 入 射 光 强 度 c：为吸光物质的浓度 b：为吸收层厚度  物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀 非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓 度c及吸收层厚度b成正比

二、实验原理菌酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。菌酮可以和游离的已糖或多糖中的已糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。6菌酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量

二、实验原理  蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离 的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后 溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。  蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样 品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。 对于特定的糖类，反应较稳定。  本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量

三，实验试剂蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL80%（V/V）硫酸中，当日配1制使用；喜溶液(0.1mg/mL）：（可滴加几滴甲苯作防腐剂)标淮葡萄糖(3)糖样品溶液

三，实验试剂 (1) 蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配 制使用； (2) 标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)： (可滴加几滴甲苯作防腐剂)； (3) 糖样品溶液

四、实验操作步骤61：制作标准曲线：取干试管6支。依次加入标准糖溶液0. 0. 2. 0. 4.0.6mL，0.8ml，1.0ml，并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入菌酮试剂4mL，震摇混匀。沸水浴准确煮沸10min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620（同时测定样品）。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线

四 、实验操作步骤  1. 制作标准曲线： 取干试管6支，依次加入标准糖溶液 0，0.2，0.4， 0.6mL,0.8ml，1.0ml,并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各 管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。沸水浴准确煮沸10 min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定 A620（同时测定样品）。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸 光度为纵坐标，制作标准曲线

样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品62.溶液稀释100倍。吸取1mL置试管中。再加入4mL蒽酮 试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后冷却10min后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量

 2. 样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品 溶液稀释100倍，吸取1mL置试管中，再 加入4mL蒽酮 试剂，沸水浴中煮沸10分 钟，取出后冷却10min后比色，其他条 件与做标准曲线相同，测得的吸光度值 由标准曲线查算出样品液的糖含量

管号2#3#1#4#5#6#7#标准葡00.20.40.60.81. 0萄糖溶液(ml)0蒸馏水00.80.60. 40.21. 0(m1l)样品液-////1. 0(m1)糖溶液0待测0.020.040.060.080.10浓度(mg/m1)置冰水浴中冷却5min葱酮试4.04. 04. 04. 04. 04.04.0剂(m1)沸水浴中准确加热10min，取出，用自来水冷却，室温放置10minA620nm

管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 标准葡 萄糖溶 液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0 蒸馏水 (ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 样品液 (ml) ／ ／ ／ ／ ／ ／ 1.0 糖溶液 浓度 (mg/ml) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 待测 置冰水浴中冷却5min 蒽酮试 剂(ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 沸水浴中准确加热10min，取出，用自来水冷却， 室温放置10min A620nm

五、实验结果六、结果讨论1. H,SO在实验中有什么作用？

五、实验结果 六、结果讨论： 1.H2SO4在实验中有什么作用？