福州大学：《生化分离工程》课程教学课件（PPT讲稿）第四章 沉淀法

第4章 沉淀法 ◼ 知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机 溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属 离子沉淀法。 ◼ 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理 及其适用范围；盐析法的影响因素对沉 淀效果的影响，并能根据实际情况予以 灵活应用和选择。 ◼ 难点：常用沉淀方法的灵活运用

第4章 沉淀法 ◼ 知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机 溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属 离子沉淀法。 ◼ 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理 及其适用范围；盐析法的影响因素对沉 淀效果的影响，并能根据实际情况予以 灵活应用和选择。 ◼ 难点：常用沉淀方法的灵活运用

沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类 1. 沉淀法概述

沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类 1. 沉淀法概述

◼ 盐析法 ◼ 有机溶剂沉淀法 ◼ 选择性变性沉淀法 ◼ 等电点沉淀法 ◼ 离子型聚合物沉淀法 ◼ 聚电解质沉淀法 ◼ 高价金属离子沉淀法 沉淀法分类

◼ 盐析法 ◼ 有机溶剂沉淀法 ◼ 选择性变性沉淀法 ◼ 等电点沉淀法 ◼ 离子型聚合物沉淀法 ◼ 聚电解质沉淀法 ◼ 高价金属离子沉淀法 沉淀法分类

◼ 活性蛋白 ◼ 非活性蛋白 ◼ 理化性质 ◼ 溶解度 ◼ 提取方法 蛋白质的理化性质的回顾

◼ 活性蛋白 ◼ 非活性蛋白 ◼ 理化性质 ◼ 溶解度 ◼ 提取方法 蛋白质的理化性质的回顾

◼ 盐析沉淀步骤 ◼ 加沉淀剂方式 ◼ 陈化条件 ◼ 脱盐处理 2. 盐析沉淀

◼ 盐析沉淀步骤 ◼ 加沉淀剂方式 ◼ 陈化条件 ◼ 脱盐处理 2. 盐析沉淀

盐析机理示意图

盐析机理示意图

Salting-in: NaCl +三 溶解度 NaCl KC + lonic strength 分子在其等霜點時，容易互相吸好引·聚合成沉激；加入 鹽離子會破壤這些吸引力·使分子散開·溶入水中

Salting-out: tle salting-in effect Ammonium 溶解度 sulfate Sodium sulfate Aggregate lonic stren gth 蛋白質分子表面的疏水性區域，都聚集許多水分子，當鹽類加入 時，這些水分子被抽出，以便與鹽離子進行水合，暴露出來的疏 水性區域相互結合，形成沉澱

◼ ①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶 解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度， 破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ◼ ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ◼ ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水 分子的极化，使水活度降低。 盐析的机理

◼ ①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶 解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度， 破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ◼ ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ◼ ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水 分子的极化，使水活度降低。 盐析的机理

◼ Cohn方程式logS=β-KsI ◼ Ks盐析 ◼ β盐析 ◼ 二次盐析 盐析沉淀基础

◼ Cohn方程式logS=β-KsI ◼ Ks盐析 ◼ β盐析 ◼ 二次盐析 盐析沉淀基础