大连海洋大学（大连水产学院）：《现代分析技术》课程教学资源（PPT课件）第二章 色谱技术

第二章 色谱技术

第二章 色谱技术

2.1 色谱法的基本原理  色谱法：利用混合物中各组分在两相中分配系 数不同，当流动相推动样品通过固定相时，在 两相中进行连续反复、多次分配，从而形成差 速移动，达到分离。 2.1.1 色谱法分类： 1) 按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气 相色谱 2) 按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄 层色谱

2.1 色谱法的基本原理  色谱法：利用混合物中各组分在两相中分配系 数不同，当流动相推动样品通过固定相时，在 两相中进行连续反复、多次分配，从而形成差 速移动，达到分离。 2.1.1 色谱法分类： 1) 按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气 相色谱 2) 按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄 层色谱

play stop 溶剂 叶绿素的分离

3) 按色谱过程的机理分类： 吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸 附剂上吸附力的不同，因而吸附平衡常数不同而 将组分分离 分配色谱：用液体作固定相，利用组分在液相中的 溶解度不同，因而分配系数不同进行分离 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用分子大小不同 电色谱：利用带电物质在电场作用下移动速度不同 进行分离

3) 按色谱过程的机理分类： 吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸 附剂上吸附力的不同，因而吸附平衡常数不同而 将组分分离 分配色谱：用液体作固定相，利用组分在液相中的 溶解度不同，因而分配系数不同进行分离 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用分子大小不同 电色谱：利用带电物质在电场作用下移动速度不同 进行分离

4) 亦可按仪器分: a 气相色谱( Gas chromatography ) 填充柱气相色谱（Packed column gas chromatography） 毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography) 裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography ) 顶空气相色谱 ( Headspace gas chromatography) 气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometry） b 液相色谱仪( Liquid chromatography ) 高效液相色谱( High performance liquid chromatography) 超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography) 高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis) 毛细管电色谱(Capillary electrochromatography) 液相质谱联用技术（Liquid chromatography- Mass spectrometry c 平面色谱法（Planar chromatography） 薄层色谱 ( Thin layer chromatography) 薄层电泳色谱 (Thin layer electrophoresis ) 纸色谱( Paper chromatography)

4) 亦可按仪器分: a 气相色谱( Gas chromatography ) 填充柱气相色谱（Packed column gas chromatography） 毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography) 裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography ) 顶空气相色谱 ( Headspace gas chromatography) 气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometry） b 液相色谱仪( Liquid chromatography ) 高效液相色谱( High performance liquid chromatography) 超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography) 高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis) 毛细管电色谱(Capillary electrochromatography) 液相质谱联用技术（Liquid chromatography- Mass spectrometry c 平面色谱法（Planar chromatography） 薄层色谱 ( Thin layer chromatography) 薄层电泳色谱 (Thin layer electrophoresis ) 纸色谱( Paper chromatography)

2.1.2 色谱图的重要参数 1.色谱峰 峰宽（W或Y）半峰宽（W1/2,Y1/2), 峰高（H） 标准偏差(σ)Y＝4σ ,亦称曲折点 峰宽，即峰高0.607处峰的宽度。 2.时间保留值 死时间t0， 保留时间tR， 校正保留时间tR ’＝ tR - t0 3.体积保留值 死体积V0= t0Fc，Fc -流动相的流速 保留体积VR= tRFc， 校正保留体积VR’= tR’Fc

2.1.2 色谱图的重要参数 1.色谱峰 峰宽（W或Y）半峰宽（W1/2,Y1/2), 峰高（H） 标准偏差(σ)Y＝4σ ,亦称曲折点 峰宽，即峰高0.607处峰的宽度。 2.时间保留值 死时间t0， 保留时间tR， 校正保留时间tR ’＝ tR - t0 3.体积保留值 死体积V0= t0Fc，Fc -流动相的流速 保留体积VR= tRFc， 校正保留体积VR’= tR’Fc

4. 相对保留值（分离因子，α）α＝tR1’/tR2 ’ 5. 分配比（K’)和相比（β） 分配比是指平衡时，组分在固定相和流动相中 的重量比 6.分配系数(K) 在一定温度时, 达到分配平衡后, 组分在固定相 中的浓度(Cs )与在流动相中的浓度(Cm)之比为分 配系数. K= Cm Cs

4. 相对保留值（分离因子，α）α＝tR1’/tR2 ’ 5. 分配比（K’)和相比（β） 分配比是指平衡时，组分在固定相和流动相中 的重量比 6.分配系数(K) 在一定温度时, 达到分配平衡后, 组分在固定相 中的浓度(Cs )与在流动相中的浓度(Cm)之比为分 配系数. K= Cm Cs

物理意义： 1. tR相同（±2％以内）或相对保留时间相同的是 同一物质 2. σ，Y1/2,Y也是定性的主要参数 3. 峰面积和峰高是定量的主要参数 峰面积越大，峰高越高，含量越高 当tR较短，用峰高作定量的根据 当tR较长，用峰面积作定量根据 4.峰宽或半峰宽是衡量柱效的指标或参数。 5.谱带宽度越窄，表明柱效越高

物理意义： 1. tR相同（±2％以内）或相对保留时间相同的是 同一物质 2. σ，Y1/2,Y也是定性的主要参数 3. 峰面积和峰高是定量的主要参数 峰面积越大，峰高越高，含量越高 当tR较短，用峰高作定量的根据 当tR较长，用峰面积作定量根据 4.峰宽或半峰宽是衡量柱效的指标或参数。 5.谱带宽度越窄，表明柱效越高

对于GC，用选择固定液的办法。对于 LC，用选择流动相配比的办法。再加 上程序升温（GC）或梯度淋洗（LC） 等技术，将是提高分离度的有效办法

对于GC，用选择固定液的办法。对于 LC，用选择流动相配比的办法。再加 上程序升温（GC）或梯度淋洗（LC） 等技术，将是提高分离度的有效办法

2.1.3 塔板理论 塔板理论是Martin和Synger首先提出的 色谱热力学平衡理论。它把色谱柱看作分 馏塔，把组分在色谱柱内的分离过程看成 在分馏塔中的分馏过程，即组分在塔板间 隔内的分配平衡过程

2.1.3 塔板理论 塔板理论是Martin和Synger首先提出的 色谱热力学平衡理论。它把色谱柱看作分 馏塔，把组分在色谱柱内的分离过程看成 在分馏塔中的分馏过程，即组分在塔板间 隔内的分配平衡过程