《生物化学》课程教学课件（PPT讲稿）第三章 蛋白质（蛋白质的组成）第三节 氨基酸-蛋白质的构件分子 2/2

Add ninhydrin Solution with unknown Solution tumns amount of blue (or,for amino acid proline,yellow) Measure absorbance at 570 nm The ninhydrin reaction: C00 and compare to known standards HaN-C-H Amino acid Ninhydrin Ninhydrin 0+g-g *用途：定性或定量氨基酸

* 用途: 定性或定量氨基酸

(四)巯基的反应 1巯基不稳定，易被氧化成二硫键 2半胱氨酸→胱氨酸2-SH>-S-S- 2与重金属反应 AA-SH+Ag→AA-SAgV

（四）巯基的反应 1 巯基不稳定，易被氧化成二硫键 2半胱氨酸→胱氨酸 2 -SH→-S-S- 2 与重金属反应 AA－SH ＋Ag+→AA-SAg

3二硫键的打开 氧化：Cys-S-S-Cys+HCOOOH→2AA-SO3 (磺基丙氨酸) 还原：Cys-S-S-Cys十B-巯基乙醇→2Cys-SH 4巯基的保护 巯基的烷基化试剂：碘乙酸、碘乙酰胺 SH+ICH,COOH->-SCH,COOH+HI

3 二硫键的打开 氧化：Cys-S-S-Cys + HCOOOH→2AA-SO3 - （磺基丙氨酸） 还原：Cys-S-S-Cys＋-巯基乙醇→2Cys-SH 4 巯基的保护 巯基的烷基化试剂：碘乙酸、碘乙酰胺 －SH＋ICH2COOH→－SCH2COOH＋HI

四、氨基酸的光学活性和光谱性质 1旋光性 除Gy外，都含C*,对映体，光学异构体 几乎所有天然存在的蛋白质氨基酸都为L一型 氨基酸的构型指-碳的构型

四、氨基酸的光学活性和光谱性质 1 旋光性 除Gly外，都含C*，对映体，光学异构体 几乎所有天然存在的蛋白质氨基酸都为L－型 氨基酸的构型指-碳的构型

C00 C00 CH3 CH3 日 H L-Alanine D-Alanine (a) C00 C00 HaN-C-H H-C-NH. CH3 CHs L-Alanine D-Alanine (b) C00 C00 HaN-C-H H-C-NHa CH3 CH3 L-Alanine D-Alanine (c)

2光吸收 6 Tryptophan 5 4 3 Tyrosine 0 30240250260270280290300310 Wavelength (nm)

2 光吸收

Tyr,Phe,Trp因苯环上含共轭双键，在近紫 外区吸收光，其吸收高峰在280nm左右。 A=8CL 紫外法测定蛋白质浓度的原理

Tyr, Phe, Trp 因苯环上含共轭双键， 在近紫 外区吸收光，其吸收高峰在280nm左右。 A=CL 紫外法测定蛋白质浓度的原理

第三节氨基酸的分析分离 层析系统：固定相(stationary phase) 流动相(mobile phase) 分配系数Kd 有效分配系数Kr

第三节 氨基酸的分析分离 层析系统:固定相（stationary phase） 流动相（mobile phase） 分配系数 Kd 有效分配系数 Keff

、 分配柱层析(Partition Chromatography)

一、分配柱层析（Partition Chromatography）

二、纸层析 (Filter-paper Chromatography) Rf值： 从原点到氨基酸停留点的距离/原点到 溶剂前沿的距离

二、纸层析 （Filter-paper Chromatography） Rf值： 从原点到氨基酸停留点的距离 / 原点到 溶剂前沿的距离